Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů

MACHÁČOVÁ, Eliška, Matěj PASTUCHA, Dorota SKLENÁROVÁ, Petr SKLÁDAL and Zdeněk FARKA. Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů (Immunoassay ULISA for the detection of honeybee pathogens). 2021.

Basic information

• Original name: Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů
• Name (in English): Immunoassay ULISA for the detection of honeybee pathogens
• Authors: MACHÁČOVÁ, Eliška (203 Czech Republic, belonging to the institution), Matěj PASTUCHA (203 Czech Republic, belonging to the institution), Dorota SKLENÁROVÁ (703 Slovakia, belonging to the institution), Petr SKLÁDAL (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Zdeněk FARKA (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution).
• Edition: 2021.

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Outcomes put into operation (prototype, working sample)
• Field of Study: 10406 Analytical chemistry
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• RIV identification code: RIV/00216224:14740/21:00123368
• Organization unit: Central European Institute of Technology
• Keywords in English: immunoassay; photon-upconversion nanoparticle; ULISA; american foulbrood; Peanibacillus larvae
• Technical parameters: Imunochemické stanovení s využitím foton-upkonverzních nanočástic jako značky pro detekci bakterie Paenibacillus larvae prováděné v 96jamkových mikrotitračních destičkách. Poskytuje limit detekce 2.9×10^3 CFU/mL.
• Tags: rivok

Abstract

Byla vyvinuta a optimalizována metoda pro laboratorní diagnostiku nákazy včel morem včelího plodu. Analýza je založená na detekci bakterie Peanibacillus larvae, připravená anti-P. larvae protilátka je využita pro specifické zachycení bakterie v imunostanovení využívajícím foton-upkonverzní nanočástice (UCNPs) jako značku. S využitím linkeru na bázi polyethylenglykolu byly UCNPs konjugovány s protilátkou nebo streptavidinem, tento detekční prvek byl poté použit jako alternativa ke klasickému značení v enzymovém imunostanovení ELISA (enzyme-linked imunosorbent assay). Metoda ULISA (upconversion-linked immunosorbent assay) založená na UCNPs poskytuje limit detekce 2,9×10^3 CFU/ml, což představuje 22násobné zlepšení oproti ELISA stanovení. Analýza byla úspěšně aplikována také na reálných vzorcích včel, larev a měli. Dosažené výsledky ukazují vhodnost metody pro laboratorní diagnostiku nákazy včelstev morem včelího plodu.

Abstract (in English)

Method for the laboratory diagnosis of American foulbrood was developed and optimized. The analysis is based on the detection of the bacterium Paenibacillus larvae, the prepared anti-P. larvae antibody is used for the specific capture of the bacterium in an immunoassay using photon-upconversion nanoparticles (UCNPs) as a label. The UCNPs were conjugated with antibody or streptavidin using a linker based on polyethyleneglycol; this detection element was used as an alternative to conventional labeling in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The upconversion-linked immunosorbent assay (ULISA) based on UCNPs provides a detection limit of 2.9×10^3 CFU/mL, representing a 22-fold improvement compared to ELISA. The assay was successfully applied to analyze real samples of bees, larvae, and bottom hive debris. The achieved results demonstrate the suitability of the method for laboratory diagnosis of American foulbrood.

Links

• LTAB19011, research and development project: Name: Luminiscenční imunostanovení jako citlivý nástroj pro diagnostiku nemocí včel

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Sensitive bioanalytical tools for the surveillance of honey bee diseases, INTER-ACTION

• MUNI/A/1604/2020, interní kód MU: Name: Podpora biochemického výzkumu v roce 2021

Investor: Masaryk University