Studium domnělých regulátorů genové exprese a sigma 54-závislých promotorů spirochety Treponema pallidum.

ČEJKOVÁ, Darina and David ŠMAJS. Studium domnělých regulátorů genové exprese a sigma 54-závislých promotorů spirochety Treponema pallidum. (PUTATIVE GENE EXPRESSION REGULATORS AND 54-DEPENDENT PROMOTERS OF THE SPIROCHETE TREPONEMA PALLIDUM). In Sborník abstraktů XIV. Tomáškových dnů 2005. 2005.

Basic information

• Original name: Studium domnělých regulátorů genové exprese a sigma 54-závislých promotorů spirochety Treponema pallidum.
• Name (in English): PUTATIVE GENE EXPRESSION REGULATORS AND 54-DEPENDENT PROMOTERS OF THE SPIROCHETE TREPONEMA PALLIDUM
• Authors: ČEJKOVÁ, Darina (203 Czech Republic) and David ŠMAJS (203 Czech Republic, guarantor).
• Edition: Sborník abstraktů XIV. Tomáškových dnů 2005, 2005.

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Conference abstract
• Field of Study: Genetics and molecular biology
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• RIV identification code: RIV/00216224:14110/05:00013196
• Organization unit: Faculty of Medicine
• Keywords in English: Treponema pallidum subsp. pallidum; gene expression profiling; BAC clones
• Tags: BAC clones, gene expression profiling, Treponema pallidum subsp. pallidum

Abstract

Spirocheta T pallidum ssp. pallidum, původce syfilis, je obligátní lidský patogen. Tuto treponemu nelze kultivovat v podmínkách in vitro. Sekvenace genomu a následná konstrukce BAC knihovny v E. coli otevřely nové možnosti výzkumu T. pallidum (např. studium regulace transkripce). Studium regulátorů jsme prováděli v klonech BAC knihovny T. pallidum v E. coli DH10B. Geny rpoN (kódující 54 faktor) a fhlA (kódující aktivátor transkripce) byly naklonovány do expresních, arabinózou indukovatelných, plazmidů pBAD/HisB, které jsou kompatibilní s replikačním systémem kosmidu BAC. Vyšetřili jsme růstovou křivku kmene DH10B s rekombinantními plazmidy. Metodou Q-PCR jsme vyšetřili expresi vybraných treponemálních genů po indukci exprese genů rpoN a fhlA. 54 závislé promotory jsme identifikovali analýzou in silico a předpovězené transkripty následně mapovali pomocí PCR z cDNA. Proteiny RpoN a FhlA jsou tedy pozitivní regulátory genové exprese a ovlivňují transkripci několika treponemálních genů.

Abstract (in English)

Spirochete T. pallidum ssp. pallidum, the causative agent of syphilis, is an obligate human pathogen that cannot be cultured continuously under in vitro conditions. Genome sequencing and constructions of BAC library of treponemal DNA in E. coli open new areas for the next studies (e.g. for the study on gene expression regulation). Genes rpoN (coding for 54 factor) and fhlA (coding for putative transcriptional activator) were cloned into the arabinose-inducible expression vector pBAD/HisB. Q-PCR technique was used for the study of putative gene regulation mediated by RpoN and FhlA in the clones of the BAC library. 54-dependent promoters were identified in the T. pallidum genome using in silico approach and the predicted transcripts were mapped by PCR technique. Proteins RpoN and FhlA are positive regulators of gene expression of several treponemal genes.

Links

• GA310/04/0021, research and development project: Name: Postgenomické studie syfilitické spirochety Treponema pallidum

Investor: Czech Science Foundation, Postgenomic studies on Treponema pallidum, the syphilis spirochete

• MSM0021622415, plan (intention): Name: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Molecular basis of cell and tissue regulations

• NI7351, research and development project: Name: Komparativní genomika patogenních spirochet rodu Treponema: cesta k sekvenčně specifické diagnostice

Investor: Ministry of Health of the CR