Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry

NĚMEC, Tomáš and Zdeněk GLATZ. Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry (Integration of short-end injection procedure into EMMA methodology). In Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health". Bratislava: Slovenská chemická společnost, 2006, p. 10-10. ISSN 1335-5236.

Basic information

• Original name: Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry
• Name in Czech: Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry
• Name (in English): Integration of short-end injection procedure into EMMA methodology
• Authors: NĚMEC, Tomáš and Zdeněk GLATZ.
• Edition: Bratislava, Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health" p. 10-10, 1 pp. 2006.
• Publisher: Slovenská chemická společnost

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Proceedings paper
• Field of Study: 10600 1.6 Biological sciences
• Country of publisher: Slovakia
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• Organization unit: Faculty of Science
• ISSN: 1335-5236
• Keywords in English: EMMA; short end injection
• Tags: EMMA, short end injection

Abstract

Před čtrnácti lety Bao a Reginer vyvinuli novou metodu sledování enzymatických reakcí pomocí kapilární elektroforézy (1). U této metody, kterou nazvali Electrophoretically Mediated Microanalysis (EMMA, elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza), je kapilára využita nejen k separaci, ale i jako reakční prostředí pro vlastní enzymovou reakci. Od svého objevu byla metoda EMMA použita na studium celé řady enzymových i neenzymových systémů (2-4). V této práci je demonstrována možnost kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry, což je technika vyvinutá Altriou a spol. pro dosažení kratších separačních časů v kapilarní elektroforéze (5). Tato kombinace si přitom zachovává výhody obou těchto instrumentálních přístupů. Zatímco dávkování z krátkého konce kapiláry zkracuje dobu analýzy a zvyšuje její citlivost, metoda EMMA umožňuje její plnou automatizaci a přináší značné snížení spotřeby enzymového preparátu a substrátů, což bylo dokumentováno na kinetických studiích enzymů haloalkandehalogenasy (jednosusbtrátová enzymová reakce) a rhodanasy (dvoususbtrátová enzymová reakce).

Abstract (in English)

The possibility of integration of the short-end injection mode in the EMMA methodology is demonstrated in this work on the kinetic studies of haloalkane dehalogenase and rhodanese enzymatic reactions. The essential validations of the EMMA methods combined with the short-end and long-end injection modes were performed first to confirm their accuracy. The qualitative and quantitative parameters of both approaches such as repetabilities of migration times and peak areas, limits of detection and correlation coefficients were in acceptable ranges. In addition estimated Michaelis constants for the corresponding substrate(s) were comparable being in accordance with previous literature data. Moreover the ping-pong reaction mechanism of rhodanese reaction was confirmed by means of both injection modes. This combination thus preserves the benefits of these instrumental approaches. Whereas the short-end injection procedure brought 5 to 6.5 times reduction of the analysis time and 2.5 to 4 times increase of the sensitivity, the EMMA methodology allowed full automatization of the assays while the whole kinetic studies needed only 20 ul of corresponding enzyme preparation.

Links

• GA203/06/0047, research and development project: Name: Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv

Investor: Czech Science Foundation, Capillary electrophoresis as a tool for the drug-metabolism studies

• LC06023, research and development project: Name: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR

• MSM0021622413, plan (intention): Name: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Proteins in metabolism and interaction of organisms with the environment