Stanovení adeninových nukleotidů a koenzymů za pomocí CZE s využití on-line prekoncentrační techniky field enhanced stacking

MUSILOVÁ, Jindra, Igor KUČERA a Zdeněk GLATZ. Stanovení adeninových nukleotidů a koenzymů za pomocí CZE s využití on-line prekoncentrační techniky field enhanced stacking. In Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health". 2006. ISSN 1335-5236.

Základní údaje

• Originální název: Stanovení adeninových nukleotidů a koenzymů za pomocí CZE s využití on-line prekoncentrační techniky field enhanced stacking
• Název česky: Stanovení adeninových nukleotidů a koenzymů za pomocí CZE s využití on-line prekoncentrační techniky field enhanced stacking
• Název anglicky: Determination of AMP, ADP, ATP, NAD, NADH, NADP,NADPH by means of CZE in combination with field enhanced stacking.
• Autoři: MUSILOVÁ, Jindra, Igor KUČERA a Zdeněk GLATZ.
• Vydání: Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health" 2006.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Slovensko
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• ISSN: 1335-5236
• Klíčová slova anglicky: Malondialdehyde HPLC
• Štítky: Malondialdehyde HPLC

Anotace

Adeninové nukleotidy patří mezi centrální metabolity komplexní metabolické sítě buněk. Jejich stanovení má podstatný význam pro metabolomické studie neboť jejich hladina (spolu s koenzymy) odráží energetický stav buňky, který je vysoce dynamický v závislosti na fyziologických podmínkách během buněčného růstu a smrti. Byla vypracována metoda pro stanovení adeninových nukleotidů (ATP, ADP, AMP) a koenzymů (NAD+, NADH , NADP+, NADPH) pomocí kapilární zónové elektroforézy v kombinaci s on-line prekoncentrační technikou field enhanced stacking. Separace těchto analytů probíhala v křemenné kapiláře o vnitřním průměru 75 um, přičemž byl použit 100 mM amoniumuhličitanový základní elektrolyt o pH 9,6. Pro zvýšení selektivity byl do základního elektrolytu přidán beta-cyklodextrin do výsledné 5 mM koncentrace. Vzorky připravené rozpuštěním v deionizované vodě byly do kapiláry nadávkovány hydrodynamicky tlakem 35 mbar po dobu 20 s. Separace byla prováděna při napětí 18 kV (pozitivní polarita). Detekce analytů byla provedena pomocí UV absorpce při vlnové délce 260 a 340 nm. Díky použití uvedené prekoncentrační techniky došlo ke zvýšení citlivosti až 10,5 x oproti běžným CZE metodám s klasickým dávkováním (3s při 50 mbar). Vyvinutá metoda byla aplikována na bezbuněčný extrakt bakterie Paracoccus denitrificans, kde byly zaznamenány koncentrační změny AMP, ADP, NAD+ a NADP+ s prodlužující se dobou aktivity respiračního řetězce.

Anotace anglicky

A new method was developed for determination of AMP, ADP, ATP, NAD, NADH, NADP,NADPH by means of CZE in combination with field enhanced stacking.

Návaznosti

• GA203/06/1179, projekt VaV: Název: Monolitické stacionární fáze pro moderní kapalinové separační metody

Investor: Grantová agentura ČR, Monolitické stacionární fáze pro moderní kapalinové separační metody

• LC06023, projekt VaV: Název: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

• MSM0021622413, záměr: Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím