J 2006

In situ hybridisation technique for mRNA detection in whole mount Arabidopsis samples.

HEJÁTKO, Jan, I. BLILOU, P. B BREWER, Jiří FRIML, B. SCHERES et. al.

Basic information

Original name

In situ hybridisation technique for mRNA detection in whole mount Arabidopsis samples.

Name in Czech

In situ hybridizace pro detekci mRNA Arabidopsis metodou whole-mount.

Authors

HEJÁTKO, Jan (203 Czech Republic, guarantor), I. BLILOU (528 Netherlands), P. B BREWER (36 Australia), Jiří FRIML (203 Czech Republic), B. SCHERES (528 Netherlands) and Eva BENKOVA (703 Slovakia)

Edition

Nature Protocols, U.S.A. Nature Publishing Group, 2006, 1745-2473

Other information

Language

English

Type of outcome

Článek v odborném periodiku

Field of Study

Genetics and molecular biology

Country of publisher

United States of America

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impact factor

Impact factor: 12.040

RIV identification code

RIV/00216224:14310/06:00018083

Organization unit

Faculty of Science

UT WoS

000251155500033

Keywords in English

in situ mRNA localization; whole mount; Arabidopsis

Tags

International impact, Reviewed
Změněno: 8/7/2009 17:18, doc. RNDr. Jan Hejátko, Ph.D.

Abstract

V originále

High throughput microarray transcription analyses provide us with the expression profiles for large amounts of plant genes. However, their tissue and cellular resolution is limited. Thus, for detailed functional analysis, it is still necessary to examine the expression pattern of selected candidate genes at a cellular level. Here, we present an in situ mRNA hybridisation method that is routinely used for the analysis of plant gene expression patterns. The protocol is optimised for whole mount mRNA localisations in Arabidopsis seedling tissues including embryos, roots, hypocotyls and young primary leaves. It can also be used for comparable tissues in other species. Part of the protocol can also be automated and performed by a liquid handling robot. Here we present a detailed protocol, recommended controls and troubleshooting, along with examples of several applications. The total time to carry out the entire procedure is ~7 d, depending on the tissue used.

In Czech

In situ lokalizace genů je technika, která umožňuje přesnou lokalizaci transkripční aktivity jednotlivých genů na úrovni pletiv i jednotlivých buněk. Zde prezentujeme metodu, která je rutinně využívána v analýze genové exprese a to metodou whole mount, tedy bez nutnosti připravovat řezy. Metoda je vhodná pro analýzu genové exprese v mnoha různých typů pletiv Arabidopsis thaliana, včetně embryí, kořenů, hypokotylů a mladých listů. Je předkládán detailní popis celé metody včetně doporučených kontrol a řešení potenciálních problémů s příklady aplikace protokolu na konkrétní geny. Celkový čas nutný k provedení metody je přibližně 7 dní.

Links

LC06034, research and development project
Name: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Regulation of morphogenesis of plant cells and organs
MSM0021622415, plan (intention)
Name: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Molecular basis of cell and tissue regulations