MASAŘÍK, Michal, K. CAHOVÁ, René KIZEK, Emil PALEČEK a Miroslav FOJTA. Label-free voltammetric detection of single nucleotide mismatches recognized by MutS protein. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY. HEIDELBERG, GERMANY: SPRINGER-VERLAG HEIDELBERG, 2007, roč. 388, č. 1, s. 259-270. ISSN 1618-2642.
Další formáty:   BibTeX LaTeX RIS
Základní údaje
Originální název Label-free voltammetric detection of single nucleotide mismatches recognized by MutS protein
Název česky Voltametrická detekce změn jednoho nukletidu pomoci MutS proteinu bez pouziti znacek
Autoři MASAŘÍK, Michal (203 Česká republika), K. CAHOVÁ (203 Česká republika), René KIZEK (203 Česká republika, garant), Emil PALEČEK (203 Česká republika) a Miroslav FOJTA (203 Česká republika).
Vydání ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY, HEIDELBERG, GERMANY, SPRINGER-VERLAG HEIDELBERG, 2007, 1618-2642.
Další údaje
Originální jazyk angličtina
Typ výsledku Článek v odborném periodiku
Obor Genetika a molekulární biologie
Stát vydavatele Německo
Utajení není předmětem státního či obchodního tajemství
Impakt faktor Impact factor: 2.867
Kód RIV RIV/00216224:14110/07:00022108
Organizační jednotka Lékařská fakulta
UT WoS 000245292200032
Klíčová slova anglicky voltammetric detection;single nucleotide mismatches; MutS protein
Štítky MutS protein, single nucleotide mismatches, voltammetric detection
Příznaky Recenzováno
Změnil Změnil: prof. RNDr. Michal Masařík, Ph.D., učo 21142. Změněno: 25. 6. 2009 10:45.
Anotace
MutS, a protein involved in DNA mismatch repair, recognizes mispaired and unpaired bases in duplex DNA. We have previously used MutS in an electrochemical double-surface technique (DST) for in-vitro detection of point mutations in DNA. The DST involved binding of unlabeled MutS to DNA heteroduplexes at the surface of magnetic beads followed by a highly sensitive electrochemical determination of the protein by measurement of a catalytic protein signal (peak H) at mercury electrodes. Detection of MutS using a peak resulting from oxidation of tyrosine and tryptophan residues of the protein at a carbon-paste electrode (CPE) was also possible but was approximately three orders of magnitude less sensitive. In this work we present an optimized technique for ex-situ voltammetric determination of MutS at a CPE. Choice of optimum experimental conditions (pH of supporting electrolyte, square-wave voltammetry settings, etc.) resulted in substantial improvement of the sensitivity of the assay, enabling detection of approximately 140 pg (1.6 fmol protein monomer) MutS in a 5-mu L sample. The sensitivity was increased further by acid hydrolysis of the protein before measurement. The hydrolyzed protein was detectable down to 5 pg (approx. 56 amol) MutS in 5 mu L solution. By using the DST combined with determination of the bound unlabeled MutS at the CPE we demonstrated selective interactions of the protein with single-base mismatches and discrimination among different base mispairs in 30-mer or 95-mer DNA duplexes. In agreement with previous studies, binding of the protein to the 30-mer substrates followed the trend G:T >> C:A > A:A > C:T > homoduplex. The electrochemical data were confirmed by use of an independent technique-a quartz-crystal microbalance for real-time monitoring of MutS interactions with DNA duplexes containing different base mispairs. By using the electrochemical DST a G:T mismatch was detectable in up to 1000-fold excess of homoduplex DNA.
Anotace česky
Voltametrická detekce změn jednoho nukletidu pomoci MutS proteinu bez pouziti znacek
Návaznosti
LC06035, projekt VaVNázev: Centrum biofyzikální chemie, bioelektrochemie a bioanalýzy. Nové nástroje pro genomiku, proteomiku a biomedicínu.
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Centrum biofyzikální chemie, bioelektrochemie a bioanalýzy. Nové nástroje pro genomiku, proteomiku a biomedicínu
VytisknoutZobrazeno: 16. 7. 2024 02:16