Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové
histidinkinázy CKI1

D 2007

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO et. al.

Basic information

Original name

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

Name (in English)

Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1

Authors

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO and Lubomír JANDA

Edition

1. vyd. Olomouc (ČR), Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti, p. 64-64, 2007

Publisher

Česká společnost experimentální biologie rostlin

Other information

Language

Czech

Type of outcome

Stať ve sborníku

Field of Study

Genetics and molecular biology

Country of publisher

Czech Republic

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

References:

URL

Organization unit

Faculty of Science

ISBN

1213-6670

Keywords in English

cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification

Abstract

V originále

Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.

Links

LC06034, research and development project

Name: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Regulation of morphogenesis of plant cells and organs

MSM0021622415, plan (intention)

Name: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Molecular basis of cell and tissue regulations

Citovat

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO and Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1 (Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1). In Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti. 1st ed. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, p. 64. ISBN 1213-6670.

@inproceedings{744196,
   author = {Pekárová, Blanka and Borkovcová, Petra and Brzobohatý, Břetislav and Urbaníková, Ľubica and Hejátko, Jan and Janda, Lubomír},
   address = {Olomouc (ČR)},
   booktitle = {Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti},
   edition = {1.},
   keywords = {cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification},
   language = {cze},
   location = {Olomouc (ČR)},
   isbn = {1213-6670},
   pages = {64-64},
   publisher = {Česká společnost experimentální biologie rostlin},
   title = {Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1},
   url = {http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007},
   year = {2007}
}

TY  - JOUR
ID  - 744196
AU  - Pekárová, Blanka - Borkovcová, Petra - Brzobohatý, Břetislav - Urbaníková, Ľubica - Hejátko, Jan - Janda, Lubomír
PY  - 2007
TI  - Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1
PB  - Česká společnost experimentální biologie rostlin
CY  - Olomouc (ČR)
SN  - 12136670
KW  - cytokinins
KW  - histidine kinase
KW  - CKI1
KW  - receiver domain
KW  - purification
UR  - http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007
N2  - Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.
ER  -

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO and Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1 (Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1). In \textit{Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti}. 1st ed. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, p.~64. ISBN~1213-6670.

Detailed Information on Publication Record