Identifikace a studium funkce mikroRNA s prediktivním a prognostickým významem u pacientů s kolorektálním karcinomem

SLABÝ, Ondřej, Roman HRSTKA, Kateřina SOBKOVÁ, Lenka DUBSKÁ, Marek SVOBODA, Jaroslava OVESNÁ and Rostislav VYZULA. Identifikace a studium funkce mikroRNA s prediktivním a prognostickým významem u pacientů s kolorektálním karcinomem (Identification and functional studies of microRNAs with predictive and prognostic significance in colorectal cancer patients). In Edukační sborník. XXXII. Brněnské onkologické dny s XXII. Konferencí pro sestry a laboranty. (ISBN: 978-9780-86793-11-5). Brno: Masarykův onkologický ústav, 2008, p. 30-30. ISBN 978-978-086-793-5.

Basic information

• Original name: Identifikace a studium funkce mikroRNA s prediktivním a prognostickým významem u pacientů s kolorektálním karcinomem
• Name in Czech: Identifikace a studium funkce mikroRNA s prediktivním a prognostickým významem u pacientů s kolorektálním karcinomem
• Name (in English): Identification and functional studies of microRNAs with predictive and prognostic significance in colorectal cancer patients
• Authors: SLABÝ, Ondřej, Roman HRSTKA, Kateřina SOBKOVÁ, Lenka DUBSKÁ, Marek SVOBODA, Jaroslava OVESNÁ and Rostislav VYZULA.
• Edition: Brno, Edukační sborník. XXXII. Brněnské onkologické dny s XXII. Konferencí pro sestry a laboranty. (ISBN: 978-9780-86793-11-5), p. 30-30, 1 pp. 2008.
• Publisher: Masarykův onkologický ústav

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Proceedings paper
• Field of Study: 30200 3.2 Clinical medicine
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• WWW: URL
• Organization unit: Faculty of Medicine
• ISBN: 978-978-086-793-5
• Keywords in English: microRNA; colorectal cancer; profiling; p53; apoptosis
• Tags: apoptosis, Colorectal cancer, microRNA, p53, profiling

Abstract

MikroRNA (miRNA) tvoří velkou skupinu krátkých nekódujících RNA post-transkripčně regulujících genovou expresi. Na základě schopnosti miRNA regulovat translaci onkogenů a nádorových supresorů, lze předpokládat jejich funkční zapojení do procesů kancerogeneze. Ve výzkumu nádorů tlustého střeva a konečníku již byly zveřejněny práce definující profily exprese miRNA odlišující nádorovou tkáň od zdravé střevní sliznice či schopnost vybraných miRNA vykazovat funkci nádorového supresoru nebo onkogenu. V naší studii jsme metodou Real-Time PCR sledovali vztah vybraných miRNA ke klinicko-patologickým charakteristikám kolorektálního karcinomu (CRC) na souboru 29 pacientů. Nejvyšší hladiny v nádorové tkáni oproti normálnímu střevnímu epitelu vykazovala miR-21 (p=0,0001), kterou jsme pozitivně asociovali také s postižením lymfatických uzlin (p=0,027) a rozvojem vzdálených metastáz (p=0,009). K objasnění funkce miR-21 v patogenezi CRC jsme provedli in vitro studii na buňkách kolorektálního karcinomu DLD1 a SW837. Za tímto účelem jsme do buněk transientně transfekovali 2-O-methylované oligonukleotidy, anti-miRNA-21, což vedlo k reprodukovatelnému poklesu hladin miR-21 na 12%-15% oproti expresi v kontrolních buňkách, do kterých byl transfekován 2-OMe-EGFP. Pro normalizaci dat byla použita malá jaderná U6B RNA (RNU6B), jejíž exprese nebyla transfekcí ani v jednom případě ovlivněna. Transfekce anti-miRNA-21 vedla k přibližně 30% poklesu proliferace obou testovaných linií při měření MTT testem. V současné době testujeme vliv anti-miRNA-21 na senzitizaci buněk k panelu cytostatik (5-fluorouracil, irinotekan, oxaliplatina), její vliv na buněčný cyklus průtokovou cytometrií a invazivní vlastnosti pomocí matrigelového testu invazivity. Zdvojnásobili jsme zkoumaný soubor pacientů a doplnili ho o další klinicko-patologické údaje včetně parametrů přežití. Věříme, že naše práce je dalším příspěvkem ke studiu funkcí miRNA v regulaci apoptózy, buněčné proliferace a diferenciace během patogeneze kolorektálního karcinomu. Práce byla podpofiena grantem IGA MZ ČR NR/9076-4 a výzkumným záměrem MZ0MOU2005.

Abstract (in English)

MicroRNAs (miRNAs) are a large group of short non-coding RNA post-transcriptionally regulate gene expression. Based on the ability miRNAs regulate translation of oncogenes and tumor suppressor genes, can assume the functional involved in the carcinogenesis process. In the research of cancer of the colon and rectum have been published work that defines the expression profiles of miRNA distinguish tumor tissue from a healthy intestinal mucosa or the ability of selected miRNA function have tumor suppressor or oncogene. In our study, using Real-Time PCR followed the relationship of selected miRNAs to clinico-pathological characteristics of colorectal cancer (CRC) on a set of 29 patients. Highest levels in tumor tissue compared to normal intestinal epithelium showed miR-21 (p = 0.0001), which we also associate with positive lymph nodes (p = 0.027) and the development of distant metastases (p = 0.009). To clarify the function of miR-21 in the pathogenesis of CRC, we conducted an in vitro study on colorectal cancer cells SW837 and DLD1. To this end, we have the transient cells transfekovali 2-O-methyl oligonucleotides, anti-miRNA-21, leading to low levels reprodukovatelnému miR-21 to 12% -15% compared to expression in control cells, which was transfected into 2-Ome- EGFP. For the normalization of the data we used a small nuclear RNA U6B (RNU6B), whose expression was transfection in no case affected. Transfection of anti-miRNA-21 resulted in approximately 30% decrease in the proliferation of both tested lines in the measurement of MTT test. Currently we are testing the impact of anti-miRNA-21 in the sensitization of tumor cells to chemotherapeutic agents Panel (5-fluorouracil, irinotecan, oxaliplatin), its effect on cell cycle by flow cytometry and invasive

Links

• NR9076, research and development project: Name: Genomické profilování v predikci odpovědi na chemoradioterapii u pacientů s lokálně pokročilým karcinomem konečníku