Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb

TOLAROVÁ, Soňa, Andrea VETEŠNÍKOVÁ ŠIMKOVÁ a Pavel HYRŠL. Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb. In Tomáškovy dny 2008, sborník abstraktů. 2008.

Základní údaje

• Originální název: Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb
• Název česky: Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb
• Název anglicky: The application of bioluminescent Escherichia coli for complement system activity assay in Cyprinidae fish
• Autoři: TOLAROVÁ, Soňa, Andrea VETEŠNÍKOVÁ ŠIMKOVÁ a Pavel HYRŠL.
• Vydání: Tomáškovy dny 2008, sborník abstraktů, 2008.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• Klíčová slova anglicky: complement system; bioluminiscent bacteria; nespecific fish immunity; total pathway;alternative pathway
• Štítky: alternative pathway, bioluminiscent bacteria, Complement system, nespecific fish immunity, total pathway
• Příznaky: Mezinárodní význam

Anotace

Komplementový systém je humorální faktor vrozené imunitní odpovědi ryb. Společně s fagocytózou a systémovým zánětem tvoří hlavní část nespecifické imunity. Komplementový systém je tvořen souborem více než 30 proteinů a u ryb byly popsány tři cesty jeho aktivace: klasická, alternativní a lektinová. Celková bakteriolytická aktivita (total activity TA) zahrnující všechny tři cesty a aktivita alternativní cesty (alternative pathway AP) byly stanoveny v séru a plasmě kapra obecného, Cyprinus carpio, jelce tlouště, Leuciscus cephalus a parmy obecné, Barbus barbus, všechny druhy náleží do čeledi kaprovitých ryb. Luminometrická metoda popsaná již u lososovitých ryb je založena na detekci produkce světela rekombinantním kmenem E. coli. Tato gram-negativní bakterie je citlivá k lýze způsobené komplementem, existuje tedy korelace mezi viabilitou bakterií a produkcí světla. Kontinuální měření bakteriální bioluminiscence probíhalo 3 hodiny v laboratorní teplotě. Jako měřený parametr byl použit čas potřebný pro usmrcení 50% bakterií. Bakteriolytická aktivita byla detekovatelná jak u TA, tak u AP. Spolehlivější výsledky však byly získány u TA, protože 50% pokles viability u AP nebyl vždy detekovatelný. Za účelem optimalizace metody byly testovány různé koncentrace vzorku každého druhu (TA: 0 , 350 mikrolitr/ml; AP: 0 , 400 mikrolitr/ml) a vybrané koncentrace byly použity pro následující analýzy. Vzorek plasmy parmy obecné, Barbus barbus o koncentraci 100 mikrolitr/ml potřeboval 1,48 hodin pro usmrcení 50% bakterií a vzorek jelce tlouště, Leuciscus cephalus o stejné koncentraci 1,97 hodin. K dosažení podobných hodnot u kapra obecného, Cyprinus carpio byla zapotřebí vyšší koncentrace plasmy, a to 300 mikrolitr/ml.

Anotace anglicky

The complement system plays an essential role in humoral innate immune response in fish. Together with phagocytosis and systemic inflammation composes main part of the non-specific immunity. Complement system is composed of more than 30 proteins and three pathways of its activation have been described in fish: classical, alternative and possible lectine. The total bacteriolytic activity (TA) including all pathways and activity of alternative pathway (AP) only were assessed in serum and plasma of common carp, Cyprinus carpio, European chub, Leuciscus cephalus and barbel, Barbus barbus, all field collected species belong to Cyprinidae family. The principle of luminometric method described previously on salmonids is based on detection of light production by bioluminescent recombinant strain of Escherichia coli. This Gramm-negative bacterium is sensitive to lysis caused by complement system, so there is a correlation between viability of bacteria and light production. Continuous measurement of bacterial bioluminescence occured 3 hours at laboratory temperature. Time needed for 50% killing of bacteria by sample was used as the measured parameter. The bacteriolytic activity was detectable in both TA and AP. More reliable results were obtained by TA because 50% decrease caused by AP was not always detectable. To optimise the method for exact fish species, different concentration of sample were tested (TA: 0, 350 microlitre/ml; AP: 0 , 400 microlitre/ml). Selected concentrations were used for following analysis. The plasma sample of concentration 100 microlitre/ml needed 1,48 hours for 50% killing of bacteria in Barbus barbus, and 1,97 hours in Leuciscus cephalus respectively. Plasma sample of Cyprinus carpio needed higher concentration of plasma 300 microlitre/ml to reach similar values.

Návaznosti

• GA524/07/0188, projekt VaV: Název: Úloha imunitní investice v kontextu kompromisů: imunoekologické studium vztahů mezi reprodukcí, imunitou a parazitizmem u sladkovodních ryb

Investor: Grantová agentura ČR, Úloha imunitní investice v kontextu kompromisů: imunoekologické studium vztahů mezi reprodukcí, imunitou a parazitizmem u sladkovodních ryb