Detailed Information on Publication Record
2008
Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb
TOLAROVÁ, Soňa, Andrea VETEŠNÍKOVÁ ŠIMKOVÁ and Pavel HYRŠLBasic information
Original name
Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb
Name in Czech
Využití bioluminiscenční bakterie Escherichia coli pro stanovení aktivity komplementového systému kaprovitých ryb
Name (in English)
The application of bioluminescent Escherichia coli for complement system activity assay in Cyprinidae fish
Authors
TOLAROVÁ, Soňa, Andrea VETEŠNÍKOVÁ ŠIMKOVÁ and Pavel HYRŠL
Edition
Tomáškovy dny 2008, sborník abstraktů, 2008
Other information
Language
Czech
Type of outcome
Konferenční abstrakt
Field of Study
10600 1.6 Biological sciences
Country of publisher
Czech Republic
Confidentiality degree
není předmětem státního či obchodního tajemství
Organization unit
Faculty of Science
Keywords in English
complement system; bioluminiscent bacteria; nespecific fish immunity; total pathway;alternative pathway
Tags
Tags
International impact
Změněno: 18/5/2011 10:47, doc. RNDr. Pavel Hyršl, Ph.D.
V originále
Komplementový systém je humorální faktor vrozené imunitní odpovědi ryb. Společně s fagocytózou a systémovým zánětem tvoří hlavní část nespecifické imunity. Komplementový systém je tvořen souborem více než 30 proteinů a u ryb byly popsány tři cesty jeho aktivace: klasická, alternativní a lektinová. Celková bakteriolytická aktivita (total activity TA) zahrnující všechny tři cesty a aktivita alternativní cesty (alternative pathway AP) byly stanoveny v séru a plasmě kapra obecného, Cyprinus carpio, jelce tlouště, Leuciscus cephalus a parmy obecné, Barbus barbus, všechny druhy náleží do čeledi kaprovitých ryb. Luminometrická metoda popsaná již u lososovitých ryb je založena na detekci produkce světela rekombinantním kmenem E. coli. Tato gram-negativní bakterie je citlivá k lýze způsobené komplementem, existuje tedy korelace mezi viabilitou bakterií a produkcí světla. Kontinuální měření bakteriální bioluminiscence probíhalo 3 hodiny v laboratorní teplotě. Jako měřený parametr byl použit čas potřebný pro usmrcení 50% bakterií. Bakteriolytická aktivita byla detekovatelná jak u TA, tak u AP. Spolehlivější výsledky však byly získány u TA, protože 50% pokles viability u AP nebyl vždy detekovatelný. Za účelem optimalizace metody byly testovány různé koncentrace vzorku každého druhu (TA: 0 , 350 mikrolitr/ml; AP: 0 , 400 mikrolitr/ml) a vybrané koncentrace byly použity pro následující analýzy. Vzorek plasmy parmy obecné, Barbus barbus o koncentraci 100 mikrolitr/ml potřeboval 1,48 hodin pro usmrcení 50% bakterií a vzorek jelce tlouště, Leuciscus cephalus o stejné koncentraci 1,97 hodin. K dosažení podobných hodnot u kapra obecného, Cyprinus carpio byla zapotřebí vyšší koncentrace plasmy, a to 300 mikrolitr/ml.
In English
The complement system plays an essential role in humoral innate immune response in fish. Together with phagocytosis and systemic inflammation composes main part of the non-specific immunity. Complement system is composed of more than 30 proteins and three pathways of its activation have been described in fish: classical, alternative and possible lectine. The total bacteriolytic activity (TA) including all pathways and activity of alternative pathway (AP) only were assessed in serum and plasma of common carp, Cyprinus carpio, European chub, Leuciscus cephalus and barbel, Barbus barbus, all field collected species belong to Cyprinidae family. The principle of luminometric method described previously on salmonids is based on detection of light production by bioluminescent recombinant strain of Escherichia coli. This Gramm-negative bacterium is sensitive to lysis caused by complement system, so there is a correlation between viability of bacteria and light production. Continuous measurement of bacterial bioluminescence occured 3 hours at laboratory temperature. Time needed for 50% killing of bacteria by sample was used as the measured parameter. The bacteriolytic activity was detectable in both TA and AP. More reliable results were obtained by TA because 50% decrease caused by AP was not always detectable. To optimise the method for exact fish species, different concentration of sample were tested (TA: 0, 350 microlitre/ml; AP: 0 , 400 microlitre/ml). Selected concentrations were used for following analysis. The plasma sample of concentration 100 microlitre/ml needed 1,48 hours for 50% killing of bacteria in Barbus barbus, and 1,97 hours in Leuciscus cephalus respectively. Plasma sample of Cyprinus carpio needed higher concentration of plasma 300 microlitre/ml to reach similar values.
Links
| GA524/07/0188, research and development project |
|