První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na
mikroskopická skla

a 2008

První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla

BUREŠOVÁ, Ivana, Renata KUPSKÁ, Tomáš PERUTKA and Roman HÁJEK

Basic information

Original name

První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla

Authors

BUREŠOVÁ, Ivana, Renata KUPSKÁ, Tomáš PERUTKA and Roman HÁJEK

Edition

3) IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie, 2008

Other information

Type of outcome

Konferenční abstrakt

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

Organization unit

Faculty of Medicine

Keywords in English

plasma cells; multiple myeloma; FACS

Abstract

V originále

Úvod: Monoklonální gamapatie, zvláště ve svých počátečních stádiích, jsou charakteristické nízkým zastoupením patologické populace. Nízká čistota jde ruku v ruce s nízkým absolutním počtem buněk, které lze získat z odběru kostní dřeně. Výzkum monoklonálních gamapatií je tak nemyslitelný bez separačních postupů. Daní za čistotu vytříděné populace jsou vyšší ztráty. Jednou z možností, jak snížit požadavky na množství buněk, je využít jejich třídění přímo na mikroskopické sklo pro cytogenetické vyšetření metodami FISH. Tento postup je doporučován i Evropskou myelomovou sítí (EMN). Uvádíme naše první zkušenosti s metodou. Materiál a metody: Pro třídění buněk byla využita mononukleární frakce získaná gradientovou centrifugací z heparinizované kostní dřeně pacientů s monoklonálními gamapatiemi, odebrané do Iscova média. Před tříděním byly buňky označeny protilátkou proti CD138. Parametry buněčného sorteru byly nastaveny speciálně pro třídění na mikroskopické sklo a třídění probíhalo jednak na suché sklo, jednak na něj byly před tříděním aplikovány různé roztoky. Byl sledován jejich vliv na výsledný tvar buněk a jejich čitelnost po obarvení jader a aplikaci fluorescenčních sond. Výsledky: Byly odladěny parametry nastavení sortru pro třídění buněk přímo na mikroskopické sklo. Ukázalo se, že pro použití buněk pro FISH je rozhodující roztok, do kterého budou buňky tříděny, jeho množství a forma aplikace. Integritu a tvar buněk příznivě ovlivňuje např. telecí fetální sérum - ve větší vrstvě ale zhoršuje čitelnost, nebo fixativ, který ale rychle vysychá, což je problém při déletrvajícím třídění. Závěr: Bylo ověřeno, že buňky vytříděné přímo na mikroskopické sklo lze použít pro vyšetření pomocí FISH. Zavedení této metodiky vidíme jako významný krok k výzkumu jedinců s MGUS, kde bývá zastoupení patologické populace často tak nízké, že i při zpracování relativně velkého objemu kostní dřeně lze získat řádově jen desítky tisíc buněk.

Links

LC06027, research and development project

Name: Univerzitní výzkumné centrum - Česká myelomová skupina (Acronym: LC MGUS)

Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, University Research Centre - Czech Myeloma Group

Citovat

BUREŠOVÁ, Ivana, Renata KUPSKÁ, Tomáš PERUTKA and Roman HÁJEK. První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla. In 3) IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie. 2008.

@proceedings{816660,
   author = {Burešová, Ivana and Kupská, Renata and Perutka, Tomáš and Hájek, Roman},
   booktitle = {3)   IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie},
   keywords = {plasma cells; multiple myeloma; FACS},
   title = {První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla},
   year = {2008}
}

TY  - CONF
ID  - 816660
AU  - Burešová, Ivana - Kupská, Renata - Perutka, Tomáš - Hájek, Roman
PY  - 2008
TI  - První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla
KW  - plasma cells
KW  - multiple myeloma
KW  - FACS
N2  - Úvod: Monoklonální gamapatie, zvláště ve svých počátečních stádiích, jsou charakteristické nízkým zastoupením patologické populace. Nízká čistota jde ruku v ruce s nízkým absolutním počtem buněk, které lze získat z odběru kostní dřeně. Výzkum monoklonálních gamapatií je tak nemyslitelný bez separačních postupů. Daní za čistotu vytříděné populace jsou vyšší ztráty. Jednou z možností, jak snížit požadavky na množství buněk, je využít jejich třídění přímo na mikroskopické sklo pro cytogenetické vyšetření metodami FISH. Tento postup je doporučován i Evropskou myelomovou sítí (EMN). Uvádíme naše první zkušenosti s metodou. Materiál a metody: Pro třídění buněk byla využita mononukleární frakce získaná gradientovou centrifugací z heparinizované kostní dřeně pacientů s monoklonálními gamapatiemi, odebrané do Iscova média. Před tříděním byly buňky označeny protilátkou proti CD138. Parametry buněčného sorteru byly nastaveny speciálně pro třídění na mikroskopické sklo a třídění probíhalo jednak na suché sklo, jednak na něj byly před tříděním aplikovány různé roztoky. Byl sledován jejich vliv na výsledný tvar buněk a jejich čitelnost po obarvení jader a aplikaci fluorescenčních sond. Výsledky: Byly odladěny parametry nastavení sortru pro třídění buněk přímo na mikroskopické sklo. Ukázalo se, že pro použití buněk pro FISH je rozhodující roztok, do kterého budou buňky tříděny, jeho množství a forma aplikace. Integritu a tvar buněk příznivě ovlivňuje např. telecí fetální sérum - ve větší vrstvě ale zhoršuje čitelnost, nebo fixativ, který ale rychle vysychá, což je problém při déletrvajícím třídění. Závěr: Bylo ověřeno, že buňky vytříděné přímo na mikroskopické sklo lze použít pro vyšetření pomocí FISH. Zavedení této metodiky vidíme jako významný krok k výzkumu jedinců s MGUS, kde bývá zastoupení patologické populace často tak nízké, že i při zpracování relativně velkého objemu kostní dřeně lze získat řádově jen desítky tisíc buněk.
ER  -

BUREŠOVÁ, Ivana, Renata KUPSKÁ, Tomáš PERUTKA and Roman HÁJEK. První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla. In \textit{3) IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie}. 2008.

Detailed Information on Publication Record