HYRŠL, Pavel, Pavel DOBEŠ and Ondřej VAŠÍČEK. Vybrané metody studia imunitního systému hmyzu (Selected methods in insect immunology). In Sborník abstraktů Zoologické dny Brno 2009. 2009. ISBN 978-80-87189-03-0.
Other formats:   BibTeX LaTeX RIS
Basic information
Original name Vybrané metody studia imunitního systému hmyzu
Name in Czech Vybrané metody studia imunitního systému hmyzu
Name (in English) Selected methods in insect immunology
Authors HYRŠL, Pavel, Pavel DOBEŠ and Ondřej VAŠÍČEK.
Edition Sborník abstraktů Zoologické dny Brno 2009, 2009.
Other information
Original language Czech
Type of outcome Conference abstract
Field of Study 30102 Immunology
Country of publisher Czech Republic
Confidentiality degree is not subject to a state or trade secret
Organization unit Faculty of Science
ISBN 978-80-87189-03-0
Keywords in English insect immunity; Galleria mellonella; Bombyx mori
Tags Bombyx mori, Galleria mellonella, insect immunity
Tags International impact
Changed by Changed by: Mgr. Pavel Dobeš, Ph.D., učo 150960. Changed: 30/1/2016 23:10.
Abstract
Imunitní systém hmyzu je v mnoha směrech originální a odlišný od imunitního systému savců, můžeme ho rozdělit na složku buněčnou a humorální. Buněčná složka je tvořena hemocyty, které se podílejí na fagocytóze, nodulaci a enkapsulaci. Humorální část zastupují fenoloxidázová a koagulační kaskáda, aglutininy, lysozym a další antibakteriální peptidy. Na našem pracovišti měříme řadu parametrů buněčné i humorální složky imunitního systému, používáme k tomu zejména zavíječe voskového (Galleria mellonella) a sezónně bource morušového (Bombyx mori). Mikroskopicky hodnotíme buněčné reakce (fagocytóza, nodulace a enkapsulace) a produkci reaktivních kyslíkových radikálů (RKM) hemocyty detekujeme fluorescenčně nebo luminometricky. Aktivitu enzymu fenoloxidázy (PO), která je hlavní součástí PO kaskády, lze stanovit kolorimetricky po přidání substrátu 3,4-dihydroxyfenylalaninu (DOPA), který je PO přeměňován na barevné produkty, tvorba melaninu. Ke stanovení antibakteriální aktivity se používá luminiscenční metoda založená na principu bioluminiscence. Využívá rekombinantní bakteriální kmen Escherichia coli, při čemž intenzita produkovaného světla odpovídá viabilitě bakterií. Z grafu znázorňujícího závislost luminiscence na čase je odečtena doba potřebná pro usmrcení 50% bakterií. Tato hodnota je použita jako parametr pro srovnání aktivity jednotlivých vzorků hemolymfy o stejné koncentraci. Množství lysozymu lze stanovit in vitro radiální difúzí v agaróze. Na agarové plotny obsahující Micrococcus luteus se nanesou vzorky hemolymfy nebo kalibrační roztok lysozymu. Průměry vzniklých projasněných difúzních zón se přepočítají podle kalibrační křivky na mg/ml vzorku. Složení proteinového spektra hemolymfy studujeme metodikou SDS-PAGGE (polyakrylamidová gradientová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného) s následným barvením stříbrem. Tato práce byla podpořena grantem GAČR 206/09/P470.
Abstract (in English)
Imunitní systém hmyzu je v mnoha směrech originální a odlišný od imunitního systému savců, můžeme ho rozdělit na složku buněčnou a humorální. Buněčná složka je tvořena hemocyty, které se podílejí na fagocytóze, nodulaci a enkapsulaci. Humorální část zastupují fenoloxidázová a koagulační kaskáda, aglutininy, lysozym a další antibakteriální peptidy. Na našem pracovišti měříme řadu parametrů buněčné i humorální složky imunitního systému, používáme k tomu zejména zavíječe voskového (Galleria mellonella) a sezónně bource morušového (Bombyx mori). Mikroskopicky hodnotíme buněčné reakce (fagocytóza, nodulace a enkapsulace) a produkci reaktivních kyslíkových radikálů (RKM) hemocyty detekujeme fluorescenčně nebo luminometricky. Aktivitu enzymu fenoloxidázy (PO), která je hlavní součástí PO kaskády, lze stanovit kolorimetricky po přidání substrátu 3,4-dihydroxyfenylalaninu (DOPA), který je PO přeměňován na barevné produkty, tvorba melaninu. Ke stanovení antibakteriální aktivity se používá luminiscenční metoda založená na principu bioluminiscence. Využívá rekombinantní bakteriální kmen Escherichia coli, při čemž intenzita produkovaného světla odpovídá viabilitě bakterií. Z grafu znázorňujícího závislost luminiscence na čase je odečtena doba potřebná pro usmrcení 50% bakterií. Tato hodnota je použita jako parametr pro srovnání aktivity jednotlivých vzorků hemolymfy o stejné koncentraci. Množství lysozymu lze stanovit in vitro radiální difúzí v agaróze. Na agarové plotny obsahující Micrococcus luteus se nanesou vzorky hemolymfy nebo kalibrační roztok lysozymu. Průměry vzniklých projasněných difúzních zón se přepočítají podle kalibrační křivky na mg/ml vzorku. Složení proteinového spektra hemolymfy studujeme metodikou SDS-PAGGE (polyakrylamidová gradientová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného) s následným barvením stříbrem. Tato práce byla podpořena grantem GAČR 206/09/P470.
Links
GP206/09/P470, research and development projectName: Vliv inhibitorů biosyntézy eikosanoidů na imunitu zavíječe voskového Galleria mellonella
Investor: Czech Science Foundation, The influence of the eicosanoid biosynthesis inhibitors to immunity of the wax moth Galleria mellonella
PrintDisplayed: 10/10/2024 09:22