p 2009

Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA

HORÁK, Jakub, Vendula HRDINOVÁ and Jan HEJÁTKO

Basic information

Original name

Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA

Name in Czech

Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA

Name (in English)

Studying protein-protein interactions in vivo: Y2H, BiFC, MeRA

Authors

HORÁK, Jakub (203 Czech Republic, guarantor), Vendula HRDINOVÁ (203 Czech Republic) and Jan HEJÁTKO (203 Czech Republic)

Edition

5. Metodické dny, 2009

Other information

Language

Czech

Type of outcome

Vyžádané přednášky

Field of Study

Genetics and molecular biology

Country of publisher

Czech Republic

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

RIV identification code

RIV/00216224:14310/09:00039686

Organization unit

Faculty of Science

Keywords (in Czech)

protein-proteinové interakce; kvasinkový dvouhybridní systém; bimolekulární fluorescenční komplementace; zprostředkovaná vazba na membránu; interakce in vivo; Arabidopsis

Keywords in English

protein-protein interaction; yeast two-hybrid; BiFC; bimolecular fluorescence complementatnion; MeRA; membrane recruitment assay; interactio in vivo; Arabidopsis
Změněno: 26/3/2010 16:01, Mgr. Jakub Horák, Dr. rer. nat.

Abstract

ORIG EN

V originále

Schopnost interagovat s dalšími proteiny je jednou ze základních charakteristik proteinů. K rychlému vyhledání interakčních partnerů rostlinných proteinů používáme několik metod pro in vivo analýzu proteinových interakcí v kvasinkách, nebo v transientně transoformovaných listech tabáku Nicotiana benthamiana. Kvasinkový dvouhybridní systém (Yeast two-hybrid system, Y2H) je klasickou metodou pro analýzu proteinových interakcí a je vhodné jej použít pro získání prvních interakčních informací. Výsledky je proto nutné ověřit jinými nezávislými metodami. Jednou z takových metod je bimolekulární fluorescenční komplementace (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC). Další metodou vhodnou pro analýzu interakcí mezi membránovým proteinem a cytosolikcými proteiny zprostředkované vazby na membránu (Membrane Recruitment Assay, MeRA). Pro konstrukci rekombinantní DNA používáme ve všech třech popsaných případech klonování prostřednictvím Gateway technologie.

In English

One of the fundamental characteristic of protein is the ability to interact with other proteins. Several methods are used to find interaction partners of proteins and study protein-protein interactions in vivo, e.g. in yeast or transiently transformed Nicotiana benthamiana leaves. Yeast two-hybrid assay is classical method used to obtain first information about protein interaction partners. However, it is necessary to verify yeast results by independent methods like bimolecular fluorescence complementation (BiFC) in tobacco leaves. Another method with similar experimental setup is membrane recruitment assay, which is used for studyin interactions between membrane and cytosolic protein. To construct recombinant DNA for all in vivo interaction methods, Gateway technology is used for cloning.

Links

LC06034, research and development project
Name: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Regulation of morphogenesis of plant cells and organs
MSM0021622415, plan (intention)
Name: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Molecular basis of cell and tissue regulations