MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ and Igor CRHA. Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií (Effect of homocysteine on sperm DNA integrity). In 20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8. 2010. ISSN 1801-8750.
Other formats:   BibTeX LaTeX RIS
Basic information
Original name Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií
Name in Czech Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií
Name (in English) Effect of homocysteine on sperm DNA integrity
Authors MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ and Igor CRHA.
Edition 20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8, 2010.
Other information
Original language Czech
Type of outcome Conference abstract
Field of Study 10600 1.6 Biological sciences
Country of publisher Czech Republic
Confidentiality degree is not subject to a state or trade secret
WWW URL
Organization unit Faculty of Medicine
ISSN 1801-8750
Keywords (in Czech) Homocystein, DNA, spermie, kometová analýza
Keywords in English Homocysteine, DNA, Sperm, Comet assay
Tags homocysteine, sperm DNA
Changed by Changed by: Mgr. Milena Matejovičová, Ph.D., učo 127342. Changed: 17/1/2011 12:03.
Abstract
Úvod: Schopnost homocysteinu způsobovat oxidativní stres je všeobecně známa. Reaktivní formy kyslíku (ROS) vznikají během autooxidace homocysteinu a ke vzniku neplodnosti mužů přispívají v 30 – 80 % případů. Jedním z mechanismů je přímé poškození DNA spermií. Normálně je DNA ve spermiích pevně obalena protaminy, které ji chrání před atakem ROS. Ve spermiích neplodných mužů byla prokázána nedostatečná protaminace DNA, jejímž následkem je zvýšená citlivost DNA k oxidativnímu poškození. Cílem této práce bylo zjistit, zda má zvýšená koncentrace homocysteinu v ejakulátu vliv na integritu DNA spermií. Materiál a metodika: Byly použity vzorky ejakulátů odebrané v Centru asistované reprodukce FN Brno. Všechny vzorky byly vyšetřeny mikroskopicky a měly normální hodnoty spermiogramu. Ejakulát byl ponechán 1 hodinu při pokojové teplotě do úplného zkapalnění a přibližně 1 ml zkapalněného ejakulátu byl zmrazen v tekutém dusíku bez kryoprotektivních látek a uchován pro další analýzu. Po rozmražení při pokojové teplotě byl každý vzorek rozdělen po 100 ul a bylo přidáno 100 ul roztoku homocysteinu v koncentracích 5, 12,5, 25 a 50 umol/l. Vzorky pak byly inkubovány přes noc (14 hodin) v termostatu při teplotě 36 stupních C. Ke sledování integrity DNA jsme využili kometovou analýzu. Metoda je založena na elektroforéze jaderné DNA buněk, imobilizovaných v agarózovém gelu, která následuje po lýze a denaturaci DNA. Použita byla alkalicko-neutrální modifikace analýzy (denaturace v alkalickém prostředí s pH > 13, elektroforéza v Tris-borátovém pufru, pH = 10). Vizualizace komet byla provedena barvením roztokem dusičnanu stříbrného, poškození DNA bylo vyjádřeno jako % DNA v ohonu komety a délka ohonu. Pro srovnání poškození DNA byl použit párový t-test. Výsledky: Bazální poškození představovalo 72% DNA v ohonu, statisticky významné zvýšení poškození bylo pozorováno pouze při inkubaci spermií s homocysteinem v koncentraci 50 umol/l (81,5% DNA v ohonu). Závěr: Homocystein přidaný k ejakulátu normospermiků mírně zvyšuje bazální poškození DNA.
PrintDisplayed: 27/4/2024 14:35