CE-LIF of Green Fluorescent Fusion Proteins for Investigation of Phosphorylation

MICHALCOVÁ, Lenka, Radka DOPITOVÁ, Jan HEJÁTKO, Markéta RYVOLOVÁ, Martina VÁLKOVÁ a Jan PREISLER. CE-LIF of Green Fluorescent Fusion Proteins for Investigation of Phosphorylation. In 8 th International Interdisciplinary Meeting on Bioanalysis, CECE 2011. 2011. ISBN 978-80-904959-0-6.

Základní údaje

• Originální název: CE-LIF of Green Fluorescent Fusion Proteins for Investigation of Phosphorylation
• Název česky: Výzkum fosforylace GFP fúzních proteinů pomocí techniky CE-LIF
• Autoři: MICHALCOVÁ, Lenka (203 Česká republika, domácí), Radka DOPITOVÁ (203 Česká republika, domácí), Jan HEJÁTKO (203 Česká republika, domácí), Markéta RYVOLOVÁ (203 Česká republika, domácí), Martina VÁLKOVÁ (203 Česká republika, domácí) a Jan PREISLER (203 Česká republika, garant, domácí).
• Vydání: 8 th International Interdisciplinary Meeting on Bioanalysis, CECE 2011, 2011.

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10406 Analytical chemistry
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14740/11:00050124
• Organizační jednotka: Středoevropský technologický institut
• ISBN: 978-80-904959-0-6
• Klíčová slova česky: CE-LIF, fosforylace, AHP proteiny
• Klíčová slova anglicky: CE-LIF; phosphorylation; AHP proteins
• Štítky: rivok

Anotace

In this study, CE-LIF with 405 nm laser diode was used to study AHP5 fused with GFP. AHP5-GFP fusion proteins overexpressed in E. coli were used for initial optimization of CE-LIF technique because of lower concentrations of the fusion protein produced by plant. The stability of the AHP5-GFP sample was examined; the complex was found to be unstable with GFP being released. The GFP release was not affected by either a long-term storage at -80 and -20 C or the addition of one of the inhibitors (EDTA, PMSF). These results were confirmed by the western blotting. The phosphorylation of the sample AHP5-GFP in vitro is under investigation. Gel filtration was used to obtain mass fractions for better understanding electrophoregrams. The mass fractions were investigated by CE-LIF and Western blotting-LIF and Western blotting.

Anotace česky

Ke studiu protein AHP5 fúzovaného s GFP byla použita metoda CE-LIF s budícím zdrojem laserovou diodou 405 nm. Fúzní protein AHP5-GFP byl exprimován v E.Coli a byl použit k optimalizaci metody, prototože přirozený výskyt tohoto protein je v rostlinách ve velmi nízkých koncetracích. AHP5-GFP je nestabilní a dochází k uvolňování GFP, tato skutečnost není ovlivněna teplotou skladováním (-20 a -80 C) ani přídavkem inhibitorů (EDTA, PMFS). Výsledky byly potvrzeny pomocí western blottingu. Fosforylace vzorku AHP5-GFP in vitro je nadále zkoumána. Pro lepší interpretaci elektroforegramů byl vzorek podroben gelové filtraci, kde byly získány hmotnostní frakce Ty byly zkoumány metodou CE-LIF a western blottingem

Návaznosti

• ED1.1.00/02.0068, projekt VaV: Název: CEITEC - central european institute of technology
• GA203/09/1025, projekt VaV: Název: Multidetekční platforma pro mikrokolonové separace proteinů a peptidů

Investor: Grantová agentura ČR, Standardní projekty

• MSM0021622415, záměr: Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Výzkumné záměry