J 2012

Relative expression of gammadelta T-cell receptor gene families detected by RT–PCR and capillary electrophoresis

TESAŘOVÁ, Lenka, Irena KRONTORÁD KOUTNÁ, Magdaléna DVOŘÁKOVÁ and Martin KLABUSAY

Basic information

Original name

Relative expression of gammadelta T-cell receptor gene families detected by RT–PCR and capillary electrophoresis

Name in Czech

relativní exprese gamadelta TCR genových rodin detekována pomocí RT-PCR a kapilární elektroforézy

Authors

TESAŘOVÁ, Lenka (203 Czech Republic, belonging to the institution), Irena KRONTORÁD KOUTNÁ (203 Czech Republic, guarantor, belonging to the institution), Magdaléna DVOŘÁKOVÁ (203 Czech Republic, belonging to the institution) and Martin KLABUSAY (203 Czech Republic)

Edition

International Journal of immunogenetics, Blackwell Publishing Ltd, 2012, 1744-3121

Other information

Language

English

Type of outcome

Článek v odborném periodiku

Field of Study

10601 Cell biology

Country of publisher

United Kingdom of Great Britain and Northern Ireland

Confidentiality degree

není předmětem státního či obchodního tajemství

References:

URL

Impact factor

Impact factor: 1.355

RIV identification code

RIV/00216224:14330/12:00059919

Organization unit

Faculty of Informatics

DOI

http://dx.doi.org/10.1111/j.1744-313X.2012.01114.x

UT WoS

000308406600002

Keywords (in Czech)

Zpětná PCR; Kapilární elektroforéza; gamadelta T lymfocyty; TCR; Vgama a Vdelta genové rodiny

Keywords in English

Reverse transcription PCR; Capillary electrophoresis; gammadelta T cell; TCR; Vgamma and Vdelta gene families

Tags

cbia-web
Změněno: 2/3/2018 10:13, Mgr. Lenka Tesařová, Ph.D.

Abstract

ORIG CZ

V originále

Gammadelta T cells are intensively studied because their function in infection, allergy, autoimmune disease, cancer and post-transplant period is not yet fully understood. PCR-based techniques were established to study the gamma variable (Vgamma) and delta variable (Vdelta) gene families. PCR product evaluation is routinely carried out by Southern blot analysis or the third complementarity-determining region (CDR3) spectratyping, but a fast and simple assessment of Vgamma and Vdelta gene family expression is missing. The aim of our study was to test capillary electrophoresis as a potential method for evaluating the composition of the gammadelta T-cell population. This report provides optimized PCR conditions for gammadelta T-cell receptor amplification. Further it describes the utilization of capillary electrophoresis in the Agilent 2100 Bioanalyzer to evaluate the relative expression of Vgamma and Vdelta gene families after their amplification. An application of the methodology to peripheral blood mononuclear cell samples from patients during hemato-oncological treatment is shown. The described methodology is fast and simple to operate and is therefore suitable as a first screening of the gammadelta T-cell population composition in tissues of interest.

In Czech

Gamadelta T lymfocyty jsou předmětem intenzivního výzkumu, protože jejich funkce během infekcí, alergií, autoimunitních chorob, nádorů a po transplantacích není stále plně objasněna. Ke studiu Vgama a Vdelta genových rodin byly zavedeny techniky založené na PCR. Produkty PCR jsou běžně hodnoceny pomocí Southernova blotingu či CDR3 spektratypizace, ale rychlé a jednoduché zhodnocení exprese Vgama a Vdelta genových rodin chybí. Cílem naší studie bylo zhodnotit kapilární elektroforézu jako možný nástroj na zhodnocení populace gamadelta T lymfocytů. Tato práce poskytuje optimalizované podmínky PCR na amplifikaci gamadelta TCR. Dále popisuje využití kapilární elektroforézy na přístroji Agilent 2100 Bioanalyzer pro stanovení relativní exprese Vgama a Vdelta genových rodin po jejich amplifikaci. Tato metodika je aplikována na vzorky mononukleárních buněk periferní krve od pacientů při hemato-onkologické léčbě. Uvedená metodika je rychlá a snadná na provedení, a proto je vhodná na první vyšetření složení populace gamadelta T lymfocytů v cílové tkáni.

Links

MSM0021622430, plan (intention)
Name: Funkční a molekulární charakteristiky nádorových a normálních kmenových buněk - identifikace cílů pro nová terapeutika a terapeutické strategie
Investor: Ministry of Education, Youth and Sports of the CR, Functional and molecular characteristics of cancer and normal stem cells - identification of targets for novel therapeutics and therapeutic strategies
NS9681, research and development project
Name: Studium molekulárně-biologické odpovědi na intenzivní inzulínovou terapii při plicních resekcích
Investor: Ministry of Health of the CR
Displayed: 14/11/2024 06:55