Cytokininy jsou fytohormony, které regulují rostlinný růst a
vývoj. Genom Arabidopsis thaliana kóduje tři cytokinové
receptory, ARABIDOPSIS HISTIDINE KINASE 2 (AHK2), AHK3 a AHK4,
jejichž subcelulární lokalizace je dodnes předmětem zájmu mnoha
vědeckých pracovišť. Receptory jsou v buňce lokalizovány na
plazmatické membráně a na membráně endoplazmatického retikula.
Membránová topologie však není známá. Protilátky dostatečně
citlivé a specifické rozpoznat jednotlivé receptory by byly
cenným nástrojem pro studium jejich exprese, intracelulární
lokalizace a funkční charakterizace. Cílem této diplomové práce
bylo charakterizovat 4 polyklonální a 2 monoklonální protilátky
vyvinuté pro imunodetekci AHK4 receptoru. Jako imunogeny byly
použity purifikovaný protein C-terminální přijímačové domény
AHK4 a syntetický peptid z extracelulární domény AHK4.
Protilátky vyvinuté proti přijímačové doméně byly schopny in
vitro detekovat 1 ng tohoto purifikovaného proteinu. V
bakteriálních lyzátech polyklonální protilátky detekovaly
specificky pouze AHK4 protein, zatímco monoklonální protilátky
křížově reagovaly i s CKI1 proteinem. Křížová rekce s CKI1
proteinem se u všech protilátek ukázala také v extraktech z
transgenních rostlin N. benthamiana, kde polyklonální
protilátky detekovaly i AHK3 protein. Monoklonální protilátky
však byly jediné, které byly specificky schopny rozeznat
protein AHK4 v extraktech kořenů A. thaliana. Specifita
protilátek byla testována v bakteriálním i rostlinném expresním
systému metodou Westernového přenosu. Westernový přenos nebyl
vhodný pro in vitro testování protilátek proti extracelulárnímu
peptidu AHK4. Žádná z protilátek nebyla dostatečně citlivá k
rozeznání endogenní exprese proteinu zájmu in situ. Výsledky
také ukázaly, že přijímačová doména byla vhodnější imunogen pro
získání protilátek než peptid z extracelulární domény.