Diplomová práce se zabývá návrhem a optimalizací
imunohistochemického (IHC) značení proteinu Ki-67 na řezech
sferoidů s využitím konjugátů zlatých nanočástic (AuNP).
Navržené IHC značení bylo realizováno použitím primární
biotinylované protilátky a konjugátů streptavidinu a AuNP. K
ultracitlivému zobrazování AuNP na značených řezech byla
úspěšne aplikována laserová ablace ve spojení s hmotnostní
spektrometrii s indukčne vázaným plazmatem. Protokol IHC
značení se podařilo optimalizovat s výsledkem snížení
nespecifické vazby AuNP na sferoid a jeho okolí, přičemž
srovnávací metodou byla laserová konfokálni mikroskopie IHC
značení s fluorescenčním konjugátem streptavidinu. Podařilo se
vytvořit kovalentní konjugát AuNP a sekundární protilátky a
aplikovat ho v IHC značení, kde vykazoval nejnižší míru
nespecifické vazby.
Diplomová práca sa zaoberá návrhom a optimalizáciou
imunohistochemického (IHC) značenia proteínu Ki-67 na rezoch
sferoidov s využitím konjugátov zlatých nanočástic (AuNP).
Navrhnuté značenie bolo realizované použitím primárnej
biotinylovanej protilátky a konjugátov streptavidínu a AuNP. K
ultracitlivému zobrazovaniu AuNP na značených rezoch bola
úspešne aplikovaná laserová ablácia v spojení s hmotnostnou
spektrometriou s indukčne viazanou plazmou. Protokol IHC
značenia sa podarilo optimalizovať s výsledkom zníženia
nešpecifickej väzby AuNP na sferoid a jeho okolie, pričom
zrovnávacou metódou bola laserová skenovacia konfokálna
mikroskopia IHC značenia s fluorescenčným konjugátom
streptavidínu. Podarilo sa vytvoriť kovalentný konjugát AuNP a
sekundárnej protilátky a aplikovať ho v IHC značení, kde
vykazoval najnižšiu mieru nešpecifickej väzby.