J 2017

An Efficient Method for Generation of Knockout Human Embryonic Stem Cells Using CRISPR/Cas9 System

BOHAČIAKOVÁ, Dáša, Tereza RENZOVÁ, Veronika FEDOROVÁ, Martin BARÁK, Michaela BOSÁKOVÁ et. al.

Základní údaje

Originální název

An Efficient Method for Generation of Knockout Human Embryonic Stem Cells Using CRISPR/Cas9 System

Autoři

BOHAČIAKOVÁ, Dáša (703 Slovensko, domácí), Tereza RENZOVÁ (203 Česká republika, domácí), Veronika FEDOROVÁ (203 Česká republika, domácí), Martin BARÁK (203 Česká republika, domácí), Michaela BOSÁKOVÁ (203 Česká republika, domácí), Aleš HAMPL (203 Česká republika, domácí) a Lukáš ČAJÁNEK (203 Česká republika, domácí)

Vydání

Stem Cells and Development, New York, Mary Ann Liebert, Inc. 2017, 1547-3287

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Článek v odborném periodiku

Obor

10601 Cell biology

Stát vydavatele

Spojené státy

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Odkazy

Impakt faktor

Impact factor: 3.315

Kód RIV

RIV/00216224:14110/17:00095168

Organizační jednotka

Lékařská fakulta

DOI

UT WoS

000413639900001

Klíčová slova anglicky

human embryonic stem cells; CRISPR/Cas9; gene engineering; knockout

Štítky

Příznaky

Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 15. 3. 2018 17:02, Soňa Böhmová

Anotace

V originále

Human embryonic stem cells (hESCs) represent a promising tool to study functions of genes during development, to model diseases, and to even develop therapies when combined with gene editing techniques such as CRISPR/CRISPR-associated protein-9 nuclease (Cas9) system. However, the process of disruption of gene expression by generation of null alleles is often inefficient and tedious. To circumvent these limitations, we developed a simple and efficient protocol to permanently downregulate expression of a gene of interest in hESCs using CRISPR/Cas9. We selected p53 for our proof of concept experiments. The methodology is based on series of hESC transfection, which leads to efficient downregulation of p53 expression even in polyclonal population (p53 Low cells), here proven by a loss of regulation of the expression of p53 target gene, microRNA miR-34a. We demonstrate that our approach achieves over 80% efficiency in generating hESC clonal sublines that do not express p53 protein. Importantly, we document by a set of functional experiments that such genetically modified hESCs do retain typical stem cells characteristics. In summary, we provide a simple and robust protocol to efficiently target expression of gene of interest in hESCs that can be useful for laboratories aiming to employ gene editing in their hESC applications/protocols

Návaznosti

GJ15-18316Y, projekt VaV
Název: Úloha microRNA v řízení buněčného dělení a diferenciace lidských embryonálních kmenových buněk do neurálních kmenových buněk. (Akronym: miRNA v diferenciaci lidských EK buněk)
Investor: Grantová agentura ČR, Úloha microRNA v řízení buněčného dělení a diferenciace lidských embryonálních kmenových buněk do neurálních kmenových buněk
GJ16-03269Y, projekt VaV
Název: Tau tubulin kináza 2 v ciliogenezi: molekulární mechanismy a funkční důsledky
Investor: Grantová agentura ČR, Tau tubulin kináza 2 v ciliogenezi: molekularní mechanismy a funkční důsledky
MUNI/A/1369/2016, interní kód MU
Název: Zdroje pro tkáňové inženýrství 7 (Akronym: TissueENG 7)
Investor: Masarykova univerzita, Zdroje pro tkáňové inženýrství 7, DO R. 2020_Kategorie A - Specifický výzkum - Studentské výzkumné projekty
MUNI/C/1709/2016, interní kód MU
Název: Modeling Alzheimer´s disease in 3D human neural stem cells models
Investor: Masarykova univerzita, Modeling Alzheimer´s disease in 3D human neural stem cells models, DO R. 2020 - Program rektora
ROZV/24/LF/2016, interní kód MU
Název: LF - Příspěvek IP 2016
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, LF - Příspěvek IP 2016
ROZV/25/LF/2017, interní kód MU
Název: LF - Příspěvek na IP 2017
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, LF - Příspěvek na IP 2017, Interní rozvojové projekty