Use of Rifampicin in T7 RNA Polymerase-Driven Expression of a Plant Enzyme. Rifampicin Improves Yield and Assembly.

KUDEROVÁ, Alena, Elizabeth NANAK, Martin TRUKSA a Břetislav BRZOBOHATÝ. Use of Rifampicin in T7 RNA Polymerase-Driven Expression of a Plant Enzyme. Rifampicin Improves Yield and Assembly. Protein Expression and Purification. San Diego, California: Academic Press, 1999, roč. 16, č. 3, s. 405-409. ISSN 1046-5928.

Základní údaje

• Originální název: Use of Rifampicin in T7 RNA Polymerase-Driven Expression of a Plant Enzyme. Rifampicin Improves Yield and Assembly.
• Autoři: KUDEROVÁ, Alena (203 Česká republika, domácí), Elizabeth NANAK, Martin TRUKSA a Břetislav BRZOBOHATÝ (203 Česká republika, garant, domácí).
• Vydání: Protein Expression and Purification, San Diego, California, Academic Press, 1999, 1046-5928.

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Článek v odborném periodiku
• Obor: Genetika a molekulární biologie
• Stát vydavatele: Spojené státy
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Impakt faktor: Impact factor: 1.416
• Kód RIV: RIV/00216224:14310/99:00000965
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• UT WoS: 000081814900005
• Klíčová slova anglicky: rifampicin - protein expression - T7 RNA polymerase - beta-glucosidase
• Štítky: beta-glucosidase, protein expression, rifampicin, rifampicin - protein expression - T7 RNA polymerase - beta-glucosidase, T7 RNA polymerase

Anotace

Expression systems based on high selectivity and activity of T7 RNA polymerase and presence of a strong T7 promoter have been commonly used for cloning and expression of various recombinant proteins in Escherichia coli. When protein expression is not directed to periplasm, the final yield and quality of the synthesized and purified protein then depend on various factors, protein size, amino acid sequence, solubility in cytoplasm, and folding requirements among them. The yield in the T7 RNA polymerase/promoter system can be positively influenced by use of rifampicin. In this report we describe rifampicin-enhaced expression of a plant cytokinin-specific beta-glucosidase. The antibiotic not only increased the yield of the recombinant protein, which seems to be a general phenomenon, but also favored the final assembly of the protein's subunits into a catalytically active dimer form.

Anotace česky

Expresní systémy založené na vysoké selektivitě a aktivitě T7 RNA polymerázy a přítomnosti silného T7 promotoru se běžně využívají při klonování a expresi rekombinantních proteinů v Escherichia coli. V případě, že exprese není směrována do periplazmy, konečný výtěžek a kvalita syntetizovaného proteinu závisejí na velikosti a primární sekvenci proteinu, jeho rozpustnosti v cytoplazmě včetně jeho schopnosti poskládat se za daných podmínek do terciární či kvartérní struktury. V T7 RNA polymerázovém/promotorovém systému může být tento výtěžek zvýšen použitím rifampicinu a tato práce jeho užitečnost v tomto směru detailně popisuje na příkladu exprese rostlinné cytokinin-specifické betaglukozidázy. Antibiotikum nejen zvyžuje výtěžek její exprese, ale také usnadňuje konečné uspořádání proteinových podjednotek do katalyticky aktivní dimerní formy.

Návaznosti

• MSM 143100008, záměr: Název: Genomy a jejich funkce

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Genomy a jejich funkce

• VS96096, projekt VaV: Název: Laboratoř molekulární fyziologie rostlin

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Laboratoř molekulární fyziologie rostlin