From nano- to milimolar: dimerization dissociation constant determination

NÁPLAVOVÁ, Alexandra, Aneta KOZELEKOVÁ a Jozef HRITZ. From nano- to milimolar: dimerization dissociation constant determination. In Chemistry towards Biology (CTB10). 2022. ISBN 978-80-971665-3-3.

Základní údaje

• Originální název: From nano- to milimolar: dimerization dissociation constant determination
• Název anglicky: From nano- to milimolar: dimerization dissociation constant determination
• Autoři: NÁPLAVOVÁ, Alexandra, Aneta KOZELEKOVÁ a Jozef HRITZ.
• Vydání: Chemistry towards Biology (CTB10), 2022.

Další údaje

• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• WWW: URL
• ISBN: 978-80-971665-3-3
• Klíčová slova česky: 14-3-3 protein; dimerizace; oligomerizace proteinů; 19F NMR
• Klíčová slova anglicky: 14-3-3 protein; dimerization; protein oligomerization; 19F NMR

Anotace

The self-association of proteins is the cornerstone of protein regulation, aiding proper functionality and interactome [1]. To properly understand the role of dimerization of protein, only the detection of such dimer is not sufficient, but a quantitative analysis is crucial. A parameter widely used to quantify the self-association is the dissociation constant KD [2]. The KD describes equilibrium between monomers and higher oligomers - in general, the lower the KD, the higher the propensity for oligomerization. However, KD of various proteins differs in several orders of magnitude, providing a challenge in its determination [3]. Here we showcase an array of biophysical methods for coverage of the whole relevant concentration range. For proteins with KD in nM region we optimised Förster resonance energy transfer assay [4]. In μM range an analytical size exclusion combined with multiple angle light scattering can be employed [3]. Finally, we used 19F Trp NMR for evaluation in higher concentrations. Moreover, we show application of such methods on the example of 14–3–3 proteins – cellular regulators connected to oncologic and neurodegenerative diseases [5,6].

Návaznosti

• LM2018127, velká výzkumná infrastruktura: Název: Česká infrastruktura pro integrativní strukturní biologii (Akronym: CIISB)

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Czech Infrastructure for Integrative Structural Biology

• LM2018127, velká výzkumná infrastruktura: Název: Czech Infrastructure for Integrative Structural Biology (Akronym: CIISB)

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Czech Infrastructure for Integrative Structural Biology

• LTAUSA18168, projekt VaV: Název: Selektivní NMR značení jako nástroj pro charakterizaci proteinových komplexů zapojených do neurodegenerativních onemocnění

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Selektivní NMR značení jako nástroj pro charakterizaci proteinových komplexů zapojených do neurodegenerativních onemocnění, INTER-ACTION

• MUNI/C/0091/2022, interní kód MU: Název: Structural and interaction properties of 14-3-3 proteins in the monomeric state.

Investor: Masarykova univerzita, Structural and interaction properties of 14-3-3 proteins in the monomeric state., Podpora vynikajících diplomových prací