Lokalizace spektrinu (spektrinu podobného) proteinu u kvasinek

HOLUBÁŘOVÁ, Alena, Iva SLANINOVÁ and Augustin SVOBODA. Lokalizace spektrinu (spektrinu podobného) proteinu u kvasinek (Localisation of spectrin - like protein in yeast). In In IX. Cytoskeletální klub. Praha. Praha: Čs. biologická společnost, 2001, p. 24.

Basic information

• Original name: Lokalizace spektrinu (spektrinu podobného) proteinu u kvasinek
• Name (in English): Localisation of spectrin - like protein in yeast
• Authors: HOLUBÁŘOVÁ, Alena, Iva SLANINOVÁ and Augustin SVOBODA.
• Edition: Praha. Praha, In IX. Cytoskeletální klub, p. 24-24, 2001.
• Publisher: Čs. biologická společnost

Other information

• Original language: Czech
• Type of outcome: Proceedings paper
• Field of Study: 10600 1.6 Biological sciences
• Country of publisher: Czech Republic
• Confidentiality degree: is not subject to a state or trade secret
• RIV identification code: RIV/00216224:14110/01:00005110
• Organization unit: Faculty of Medicine
• Keywords in English: spectrin; yeast
• Tags: spectrin, Yeast

Abstract

U kvasinek a protoplastů S. cerevisiae a Sch. japonicus var. versatilis byla zjišťována přítomnost spektrinu, charakteristického proteinu membránového skeletu živočišných buněk. Imunoanalýza hrubého extraktu buněčných proteinů z obou druhů kvasinek pomocí 4 anti-spektrinových protilátek (dvě polyklonální a dvě monoklonální) ukázala přítomnost dvojitého proužku v oblasti kolem 85 kDa. Reakce byla obdobná u obou kvasinek. K určení bližší lokalizace tohoto proteinu v buňkách byla použita nepřímá immunofluorescence. Nejintenzivnější fluorescence bylo dosaženo při aplikaci anti-kuřecí spektrinové protilátky (S 1390; Sigma). Intenzita fluorescence kvasinek byla srovnatelná s lidskými erytrocyty. U obou typů buněk a také u protoplastů, jak čerstvých tak rostoucích, byla fluorescence lokalizována pod buněčným povrchem. U S. cerevisiae a protoplastů obou kvasinek fluoreskoval i povrch vakuoly. U buněk Sch. versatilis byla značena také oblast septa. Ostatní testované protilátky vykazovaly jen slabou fluorescenci v podobě teček pod celým povrchem buněk a protoplastů. Nepozorovali jsme výraznější fluktuaci fluorescence za různých metabolických stavů buňky nebo růstových zónách. Přítomnost tohoto proteinu u čerstvých protoplastů prokazuje, že fluorescence není vázána na buněčnou stěnu, ale na plasmatickou membránu. Mimo plasmamembrány fluoreskují rovněž i vakuoly, což odpovídá lokalizaci spektrinu u jiných buněk (1, 2). Malá velikost proteinu (kolem 85 kDa) je v kontrastu s udávanou velikostí erytrocytárního spektrinu (220-240 kDa), což může být důsledkem degradace molekul spektrinu (fragmenty původně velké molekuly) nebo se u kvasinek vyskytuje redukovaná forma spektrinu. Vyloučena není ani reakce anti-spektrinové protilátky s jinými proteiny spektrinové rodiny, které se mohou u kvasinek také vyskytovat. Obdobné výsledky byly pozorovány i v rostlinných buňkách (85 kDa protein, cit. 1) a u Neurospory (100 kDa protein, cit. 3).

Abstract (in English)

Spectrin-like antigens were immunochemically detected and by immunofluorescence and/or immunogold-labelling localized in cells and protoplasts of budding yeasts Saccharomyces cerevisiae and fission yeasts Schizosaccharomyces japonicus var. versatilis. In these yeasts spectrin-like antigens were detected on Western blots at 220 kDa with anti-chicken and anti-human erythrocyte spectrin antibodies. Additional bands were present at 50 kDa in S. cerevisiae, 44 kDa in Sch. versatilis, 34 kDa and 20 kDa in both yeasts. Since at these molecular masses human erythrocyte spectrin was also detected, these bands could show breakdown products of spectrin or other spectrin-like proteins. Fluorescence microscope revealed labelling of spectrin-like antigens on the cell surface and vacuolar membrane and dotted fluorescence of cytoplasm of cells and protoplasts of both yeast species. In Sch. versatilis faint fluorescence of nuclei was observed. During sporulation and in mature spores spectrin-like proteins correspondently to actin patches bordered spore surface. Electron microscopy revealed immunogold staining of plasma membrane, ER, vacuole and nuclei of (in) protoplasts and cells and cell wall of cells. In higher eukaryotic cells spectrin seems to be actin-crosslinking protein (Fowler and Ruijter, 2000). Our experiments with Latrunculin B, act1-1 and cdc 42 mutants and osmotic shock indicate independence of actin and spectrin. These observations indicate the role of spectrin in stabilization of plasma membrane and other membrane structures in yeasts.

Links

• GA204/00/0394, research and development project: Name: Buněčná stěna kvasinek jako extracelulární matrix: cytoskelet a stěnové funkce

Investor: Czech Science Foundation, The yeast cell wall as an extracellular matrix: cytoskeleton and cell wall functions