Další formáty:
BibTeX
LaTeX
RIS
@inproceedings{485140,
author = {Kizek, René and Vacek, Jan and Brázdová, Marie and Trnková, Libuše},
address = {Brno, MU},
booktitle = {Sborník příspěvků, VII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů},
keywords = {spectrophotometry;UV-Vis spectra;electrophoresis;PAA gel;electrochemistry;DPV and CPSA;proteins;detection limit},
language = {cze},
location = {Brno, MU},
isbn = {80-210-3053-4},
pages = {9-10},
publisher = {Masarykova univerzita v Brně},
title = {Quantification of proteins by means of spectrophotometry. electrophoresis and electrochemistry},
year = {2003}
}
TY - JOUR
ID - 485140
AU - Kizek, René - Vacek, Jan - Brázdová, Marie - Trnková, Libuše
PY - 2003
TI - Quantification of proteins by means of spectrophotometry. electrophoresis and electrochemistry
PB - Masarykova univerzita v Brně
CY - Brno, MU
SN - 8021030534
KW - spectrophotometry;UV-Vis spectra;electrophoresis;PAA gel;electrochemistry;DPV and CPSA;proteins;detection limit
N2 - Pro kvantitativní stanovení proteinů existuje řada metod, při jejichž výběru se řídíme těmito hlavními kritérii: (a) množstvím proteinu dostupného pro analýzu, (b) koncentrací proteinu ve vzorku, (c) specifičností analýzy a (d) snadností a spolehlivostí dané metody. Některé běžně používané a snadno realizovatelné metody vyžadují jednoduchou instrumentaci a přitom jsou vysoce citlivé. Mezi takové metody patří detekce proteinu na polyakrylamidových gelech, vhodná zvláště pro purifikované proteiny. Pro stanovení proteinů v roztoku jsou vhodné i spektrofotometrické metody založené na absorpci záření v UV-Vis oblasti. Jednou z alternativních metod splňující jednoduchou instrumentaci a relativně vysokou citlivost je elektrochemie, jako např. diferenční pulzní voltammetrie - DPV a chronopotenciometrická rozpouštěcí analýza - CPSA. Modelovými proteiny pro porovnání spektrofotometrických, elektroforetických a elektrochemických měření byly hovězí albumin (bovine serum albumin - BSA, Mr 67 kDa) a tumorový supresorový protein p53 (Mr 43 kDa). Spektrální měření byla uskutečněna na spektrofotometru Hewlett Packard, polyakrylamidovová gelová elektroforéza na elektroforetickém zařízení Biorad a elektrochemická měření na analyzátoru AUTOLAB (EcoChemie, The Netherlands) ve spojení s VA-Stand 663 (Metrohm, Zurich, Switzerland). Zatímco pro stanovení koncentrace obou proteinů při 276 nm bylo využita absorpce tryptofanu, pro spektrální analýzu kolorimetricky při 595 nm bylo využito Bradfordova barvení. V případě elektroforézy byl gel barven stříbrem nebo Coomassie Brilliant Blue. Elektrochemicky byly koncentrace stanoveny metodami DPV a CPSA. Z porovnání výsledků získaných výše uvedenými metodami vyplývá, že spektrofotometrie umožňuje stanovit koncentrace proteinů v jednotkách mikrogramů/mL a elektroforéza v jednotkách nanogramů/mL. I když je kvantifikace proteinů pomocí elektrochemie srovnatelná s těmito dvěma detekčními limity, DPV a CPSA ve spojení s adsorptivním strippingem umožňují stanovení proteinů ve velmi malých objemech zkoumaného roztoku (jednotky mL).
ER -
KIZEK, René, Jan VACEK, Marie BRÁZDOVÁ a Libuše TRNKOVÁ. Quantification of proteins by means of spectrophotometry. electrophoresis and electrochemistry. In \textit{Sborník příspěvků, VII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů}. Brno, MU: Masarykova univerzita v Brně, 2003, s.~9-10. ISBN~80-210-3053-4.
|
