2003
Quantification of proteins by means of spectrophotometry. electrophoresis and electrochemistry
KIZEK, René, Jan VACEK, Marie BRÁZDOVÁ a Libuše TRNKOVÁZákladní údaje
Originální název
Quantification of proteins by means of spectrophotometry. electrophoresis and electrochemistry
Název anglicky
Quantification of proteins by means of spectrophotometry, electrophoresis and electrochemistry
Autoři
KIZEK, René (203 Česká republika), Jan VACEK (203 Česká republika), Marie BRÁZDOVÁ (203 Česká republika) a Libuše TRNKOVÁ (203 Česká republika, garant)
Vydání
Brno, MU, Sborník příspěvků, VII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů, od s. 9-10, 2 s. 2003
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10406 Analytical chemistry
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/03:00008614
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-3053-4
Klíčová slova anglicky
spectrophotometry;UV-Vis spectra;electrophoresis;PAA gel;electrochemistry;DPV and CPSA;proteins;detection limit
Štítky
Změněno: 20. 10. 2003 16:18, prof. RNDr. Libuše Trnková, CSc.
V originále
Pro kvantitativní stanovení proteinů existuje řada metod, při jejichž výběru se řídíme těmito hlavními kritérii: (a) množstvím proteinu dostupného pro analýzu, (b) koncentrací proteinu ve vzorku, (c) specifičností analýzy a (d) snadností a spolehlivostí dané metody. Některé běžně používané a snadno realizovatelné metody vyžadují jednoduchou instrumentaci a přitom jsou vysoce citlivé. Mezi takové metody patří detekce proteinu na polyakrylamidových gelech, vhodná zvláště pro purifikované proteiny. Pro stanovení proteinů v roztoku jsou vhodné i spektrofotometrické metody založené na absorpci záření v UV-Vis oblasti. Jednou z alternativních metod splňující jednoduchou instrumentaci a relativně vysokou citlivost je elektrochemie, jako např. diferenční pulzní voltammetrie - DPV a chronopotenciometrická rozpouštěcí analýza - CPSA. Modelovými proteiny pro porovnání spektrofotometrických, elektroforetických a elektrochemických měření byly hovězí albumin (bovine serum albumin - BSA, Mr 67 kDa) a tumorový supresorový protein p53 (Mr 43 kDa). Spektrální měření byla uskutečněna na spektrofotometru Hewlett Packard, polyakrylamidovová gelová elektroforéza na elektroforetickém zařízení Biorad a elektrochemická měření na analyzátoru AUTOLAB (EcoChemie, The Netherlands) ve spojení s VA-Stand 663 (Metrohm, Zurich, Switzerland). Zatímco pro stanovení koncentrace obou proteinů při 276 nm bylo využita absorpce tryptofanu, pro spektrální analýzu kolorimetricky při 595 nm bylo využito Bradfordova barvení. V případě elektroforézy byl gel barven stříbrem nebo Coomassie Brilliant Blue. Elektrochemicky byly koncentrace stanoveny metodami DPV a CPSA. Z porovnání výsledků získaných výše uvedenými metodami vyplývá, že spektrofotometrie umožňuje stanovit koncentrace proteinů v jednotkách mikrogramů/mL a elektroforéza v jednotkách nanogramů/mL. I když je kvantifikace proteinů pomocí elektrochemie srovnatelná s těmito dvěma detekčními limity, DPV a CPSA ve spojení s adsorptivním strippingem umožňují stanovení proteinů ve velmi malých objemech zkoumaného roztoku (jednotky mL).
Anglicky
For the determination of proteins, a lot of methods can be used. It is suitable to follow some criteria: (a) amount of proteins being available for analysis, (b)concentartion of proteins in samples, (c)specificity of method, and (d) facility and confidence of chosen method. In addition to spectrophotometric and electrophoretic methods, electrochemistral methods (differential pulse voltammetry and chronopotentometric stripping analysis) have been applied to the determination of bovine serum albumin - BSA, Mr 67 kDa)and tumor supressor p 53 (Mr 43 kDa). The results using these methods have been compared.
Návaznosti
| MSM 143100011, záměr |
|