2003
Electrochemical detection of chromosomal translocation T (15;17) as an acute promyelotic leukemie marker
MASAŘÍK, Michal, René KIZEK, Sabina ŠEVČÍKOVÁ, Jan VACEK, Libuše TRNKOVÁ et. al.Základní údaje
Originální název
Electrochemical detection of chromosomal translocation T (15;17) as an acute promyelotic leukemie marker
Název anglicky
Electrochemical detection of chromosomal translocation T (15;17) as an acute promyelotic leukemie marker
Autoři
MASAŘÍK, Michal (203 Česká republika), René KIZEK (203 Česká republika, garant), Sabina ŠEVČÍKOVÁ (203 Česká republika), Jan VACEK (203 Česká republika), Libuše TRNKOVÁ (203 Česká republika), František JELEN (203 Česká republika) a Jan ŠMARDA (203 Česká republika)
Vydání
Brno, Czech Republic, Sborník příspěvků, VII. pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů, od s. 60-61, 2 s. 2003
Nakladatel
Masaryk University in Brno
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10405 Electrochemistry
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/03:00007961
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-3053-4
Klíčová slova anglicky
Electrochemistry; chromosomal translocation T(15;17); promyelotic leukemie marker; PML/ RAR alfa translocation;DYNABEADS
Štítky
Změněno: 30. 5. 2003 19:29, prof. RNDr. Libuše Trnková, CSc.
V originále
Akutní myeloidní leukémie se dělí na několik podtypů a jedním z nich je i akutní promyelocytická leukémie (APL) subtyp M3, která je cytogeneticky charakterizována chromozomální translokací t(15;17). Translokovaná místa chromozomu obsahují geny, které kódují receptor alfa pro kyselinu retinovou (RARa) na chromosomu 17 a transkripční faktor PML na chromosomu 15. Transkripcí pak vzniká unikátní chimerický transkript označovaný jako PML/ RARa, který byl pozorován u všech případů APL1, 2. Pro určení APL je zcela běžně využívána řada metod (cytochemické, imunologické a cytologické)2, 3. Všechny metody jsou vhodné pro diagnostiku a typizaci AML, ale jejich nevýhodou je poměrně špatný limit záchytu leukemické buňky (jedna leukemická buňka na sto buněk normálních)3. Pro lepší detekci AML se zdá být výhodné využití molekulární analýzy chromozomálních abnormalit na základě stanovení koncentrace mRNA nebo DNA. Vhodnou metodou je reverzní polymerázová reakce (RT-PCR), která zvýší citlivost záchytu patologické buňky 1 000 až 10 000 krát4. Vysoce citlivou a selektivní metodou pro detekci unikátního smíšeného transkriptu PML/RARa je elektrochemie spojená se selektivním vyvázáním mRNA. Na kovalentně vázanou sekvenci (T25) na magnetických kuličkách (DYNABEADS) se selektivně vážou molekuly mRNA z buněčného lyzátu5. Pro důkaz přítomnosti unikátního transktriptu byla připravena hybridizační sonda s koncovou sekvencí deseti thyminů. Těchto deset thyminů bylo modifikováno osmiem, neboť je známo, že vhodnou elektrochemickou značkou je komplex osmia, který se přednostně naváže na thymin5, 6. Hybridizací nevyvázaná sonda byla odstraněna vymýváním pomocí pufru a vyvázaná sonda byla z magnetických kuliček uvolněna tepelnou denaturací. Potom vlastní elektrochemická detekce PML/RARa tedy spočívá ve využití takto modifikované hybridizační sondy. Takovou sondu, která hybridizuje ke komplementárnímu řetězci můžeme snadno a citlivě detekovat pomocí diferenční pulzní rozpouštěcí voltametrie na rtuťové visící kapce7.
Anglicky
Acute myeloid leukemias are divided into several subtypes; one of them is the acute promyelocytic leukemia (APL) subtype M3 which is cytogenetically marked by the presence of t(15;17) translocation. This translocation involves the retinoic acid receptor alpha (RARa) gene on chromosome 17 and the PML locus on chromosome 15. Expression of the fusion gene produces a unique protein chimera PML/ RARa that is found in all APL casses. Various cytochemical, immunological and cytological methods have been used for precise analysis of APL. All these methods are suitable for diagnostics and typization of AML; however, their detection limit is relatively low - about one leukemic cell per 100 healthy ones. Molecular analyses of chromosomal abnormalities based on detection of specific mRNA and DNA molecules provide more sensitive tools for detection of AML. For example, reverse transcription polymerase chain reacion (RT-PCR) increases sensitivity of leukemic cell detection up to 10000-fold. This work describes a new approach for very sensitive and selective electrochemical detection of the unique fusion transcript PML/RARa. Total mRNA molecules purified from cell lysate are covalently bound to a target sequence (T25) on paramagnetic beads (DYNABEADS). To prove the presence of the unique transcript, a specific hybridization probe containing terminal sequence of 10 thymins was prepared. These thymins were modified with osmium as it is known that a suitable electrochemical probe is composed of the osmium complex as it preferentially binds to thymins. Unbound probe was removed with washing buffer, while the bound probe was released from the beads by temperature denaturation. The electrochemical detection of PML/RARa is in fact the usage of modified hybridization probe. Such a probe that hybridizes with a complementary strand can be easily and clearly detected using differential pulse stripping voltammetry on hanging mercury drop electrode.
Návaznosti
| GA203/02/0422, projekt VaV |
| ||
| GV204/97/K084, projekt VaV |
| ||
| IAA1163201, projekt VaV |
| ||
| MSM 143100011, záměr |
|