J 2004

Study of enzyme kinetics of phenol sulfotransferase by electrophoretically mediated microanalysis

VYTISKOVÁ, Soňa, Sigrid VAN DYCK, Ann VAN SCHEPDAEL, Jos HOOGMARTENS, Zdeněk GLATZ et. al.

Základní údaje

Originální název

Study of enzyme kinetics of phenol sulfotransferase by electrophoretically mediated microanalysis

Název česky

Studium enzymove kinetiky enzymu fenolsulfotranferasy metodou EMMA

Autoři

VYTISKOVÁ, Soňa (203 Česká republika, garant), Sigrid VAN DYCK (56 Belgie), Ann VAN SCHEPDAEL (56 Belgie), Jos HOOGMARTENS (56 Belgie) a Zdeněk GLATZ (203 Česká republika)

Vydání

Journal of Chromatography A, Netherlands, Elsevier, 2004, 0021-9606

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Článek v odborném periodiku

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Nizozemské království

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impakt faktor

Impact factor: 3.105

Kód RIV

RIV/00216224:14310/04:00009928

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

UT WoS

000220121200043

Klíčová slova anglicky

Capillary electrophoresis; enzymes; EMMA; sulfotranferase
Změněno: 19. 5. 2009 18:44, prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.

Anotace

V originále

Electrophoretically mediated microanalysis (EMMA) was applied for the study of the kinetic parameters of the enzymatic reaction of phenol sulfotransferase SULT1A1 isoenzyme with 4-nitrophenol as a substrate. The SULT1A1 activity was determined by the quantitation of the product, 4-nitrophenyl sulfate, at 274 nm by using different injection and separation steps. This new approach solved the problem of the presence of the very strong inhibitor, adenosine 3',5'-bisphosphate (PAP), in the co-substrate solution (adenosine 3'-phosphate 5'-phosphosulfate, PAPS) which is unstable at room temperature. The inhibitor PAP was electrophoretically separated from the co-substrate PAPS before the injection of enzyme and substrate inside the capillary (and thus before their in-capillary encountering). With the developed in-capillary SULT1A1 activity assay an average Michaelis constant (Km) for 4-nitrophenol was calculated to be 0.84 M, a value which is consistent with a previously reported value. Strong substrate inhibition (above a 4-nitrophenol concentration of 2.5 M) was observed, and this is also in accordance with literature values.

Česky

Metoda EMMA byla využita pro studium enzymove kinetiky enzymu fenolsulfotranferasy.

Návaznosti

GA203/03/1125, projekt VaV
Název: Využití kapilární zónové elektroforézy pro studium enzymů
Investor: Grantová agentura ČR, Využití kapilární zónové elektroforézy pro studium enzymů
MSM 143100005, záměr
Název: Strukturně-funkční vztahy biomolekul a jejich role v metabolismu
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Strukturně-funkční vztahy biomolekul a jejich role v metabolismu