2004
Využití avidin-biotinové technologie pro elektrochemickou detekci nukleových kyselin
MASAŘÍK, Michal, René KIZEK, Jan VACEK, Libuše TRNKOVÁ, Ladislav HAVEL et. al.Základní údaje
Originální název
Využití avidin-biotinové technologie pro elektrochemickou detekci nukleových kyselin
Název anglicky
Application of the avidin-biotin technology for electrochemical detection of nucleic acids
Autoři
MASAŘÍK, Michal (203 Česká republika), René KIZEK (203 Česká republika, garant), Jan VACEK (203 Česká republika), Libuše TRNKOVÁ (203 Česká republika), Ladislav HAVEL (203 Česká republika) a František JELEN (203 Česká republika)
Vydání
Brno, Česká republika, Sborník příspěvků VIII. pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů, od s. 54-55, 2 s. 2004
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně, Česká republika
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10405 Electrochemistry
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/04:00009637
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-3321-5
Klíčová slova anglicky
Avidin-biotin technologa; nucleic acids; electrochemical detection of NA; carbon paste electrode; streptavidin
Štítky
Změněno: 5. 3. 2004 20:32, prof. RNDr. Libuše Trnková, CSc.
V originále
Bakterie Streptomyces avidinii produkuje streptavidin (STV), který váže biotin ze svého okolí. STV je tetramer o čtyřech identických podjednotkách složených z osmi antiparalelních beta-skládaných listů STV je složen ze 159 aminokyselin (obsahuje 6 molekul tyrosinů a 6 tryptofanů). Nedávno jsme publikovali modifikaci uhlíkové pastové elektrody STV. Elektrodový systém se skládal z modifikované pastové uhlíkové pracovní elektrody (uhlík:minerální olej; STV), Ag/AgCl/3M KCl (referenční elektroda) a pomocné platinové elektrody. Množství uhlíku a minerálního oleje ovlivňuje elektrochemickou odpověď STV přítomného v pracovní elektrodě. Zjistili jsme, že maximální signál 10 mg/mL STV přítomného v pracovní elektrodě získáme při poměru 70/30 (uhlík/minerální olej). Elektrochemické měření technikou adsorptivní přenosové square wave voltametrie (AdT SWV) bylo provedeno v prostředí acetátového pufru. Studovali jsme vliv různých koncentrací (5 -500 ng/mL) STV přidaných do pastové elektrody. Zaznamenané výšky oxidačních signálů STV vykazovaly lineární závislost vyjádřenou rovnicí: y = 1.0043x + 9.0444 (R2 = 0.996). Limit detekce STV přítomného v pracovní elektrodě byl pod 5 ng/mL. Změnou výšek elektrochemických signálů STV bylo možné pozorovat vazbu STV s biotinem. Biotin vázající se na STV vede k rychlému poklesu oxidačního signálu STV. Tohoto jevu jsme využili k analýze nukleových kyselin značených biotinem. Analyzovaný vzorek biotinylované nukleové kyseliny byl adsorbován z 6 mL a elektroda omyta v 80% ethanolu (odmytí nespecificky vázané DNA). AdT SWV poskytovala tři oxidační signály. Kolem potenciálu 0.6 V byl sledován signál STV přítomného v elektrodě, kolem potenciálu 0.8 V byl pozorovatelný oxidační signál guaninu a kolem 1.0 V se objevuje oxidační signál adeninu. Studované elektrochemické signály STV, guaninu a adeninu se mění v závislosti na jejich koncentraci. Se vzrůstající koncentraci biotinylem značené nukleové kyselin signál STV klesá a signály guaninu a adeninu vzrůstají. Nejnižší detekované koncentrace biotinylované nukleové kyseliny se pohybovaly kolem 5 mg/mL.
Anglicky
Bakterie Streptomyces avidinii produkuje streptavidin (STV), který váže biotin ze svého okolí. STV je tetramer o čtyřech identických podjednotkách složených z osmi antiparalelních beta-skládaných listů STV je složen ze 159 aminokyselin (obsahuje 6 molekul tyrosinů a 6 tryptofanů). Nedávno jsme publikovali modifikaci uhlíkové pastové elektrody STV. Elektrodový systém se skládal z modifikované pastové uhlíkové pracovní elektrody (uhlík:minerální olej; STV), Ag/AgCl/3M KCl (referenční elektroda) a pomocné platinové elektrody. Množství uhlíku a minerálního oleje ovlivňuje elektrochemickou odpověď STV přítomného v pracovní elektrodě. Zjistili jsme, že maximální signál 10 mg/mL STV přítomného v pracovní elektrodě získáme při poměru 70/30 (uhlík/minerální olej). Elektrochemické měření technikou adsorptivní přenosové square wave voltametrie (AdT SWV) bylo provedeno v prostředí acetátového pufru. Studovali jsme vliv různých koncentrací (5 -500 ng/mL) STV přidaných do pastové elektrody. Zaznamenané výčky oxidačních signálů STV vykazovaly lineární závislost vyjádřenou rovnicí: y = 1.0043x + 9.0444 (R2 = 0.996). Limit detekce STV přítomného v pracovní elektrodě byl pod 5 ng/mL. Změnou výšek elektrochemických signálů STV bylo možné pozorovat vazbu STV s biotinem. Biotin vázající se na STV vede k rychlému poklesu oxidačního signálu STV. Tohoto jevu jsme využili k analýze nukleových kyselin značených biotinem. Analyzovaný vzorek biotinylované nukleové kyseliny byl adsorbován z 6 mL a elektroda omyta v 80% ethanolu (odmytí nespecificky vázané DNA). AdT SWV poskytovala tři oxidační signály. Kolem potenciálu 0.6 V byl sledován signál STV přítomného v elektrodě, kolem potenciálu 0.8 V byl pozorovatelný oxidační signál guaninu a kolem 1.0 V se objevuje oxidační signál adeninu. Studované elektrochemické signály STV, guaninu a adeninu se mění v závislosti na jejich koncentraci. Se vzrůstající koncentraci biotinylem značené nukleové kyselin signál STV klesá a signály guaninu a adeninu vzrůstají. Nejnižší detekované koncentrace biotinylované nukleové kyseliny se pohybovaly kolem 5 mg/mL.
Návaznosti
| GA203/02/0422, projekt VaV |
| ||
| IAA1163201, projekt VaV |
|