Isolation of Chromosomes from Picea abies and their Analysis by Flow Cytometry

ÜBERALL, Ivo, J. VRÁNA, Jan BARTOŠ, Jakub ŠMERDA, Jaroslav DOLEŽEL a Ladislav HAVEL. Isolation of Chromosomes from Picea abies and their Analysis by Flow Cytometry. Biologia Plantarum. Dordrecht: KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS, 2004, roč. 48, č. 2, s. 199-203. ISSN 0006-3134.

Základní údaje

Originální název

Isolation of Chromosomes from Picea abies and their Analysis by Flow Cytometry

Název česky

Izolace chromozómů z Picea abies a jejich analýza pomocí průtokové cytometrie

Autoři

ÜBERALL, Ivo, J. VRÁNA, Jan BARTOŠ, Jakub ŠMERDA, Jaroslav DOLEŽEL a Ladislav HAVEL

Vydání

Biologia Plantarum, Dordrecht, KLUWER ACADEMIC PUBLISHERS, 2004, 0006-3134

---

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Článek v odborném periodiku

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impakt faktor

Impact factor: 0.744

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

UT WoS

000222345200007

Klíčová slova anglicky

chromosome sorting; chromosome suspensions; flow karyotype; Norway spruce

Štítky

chromosome sorting, chromosome suspensions, flow karyotype, Norway spruce

---

Anotace

V originále

A high-yield method for preparation of suspensions of intact Norway spruce [Picea abies (L.) Karst.] chromosomes was developed for the first time. To accumulate meristem root tip cells at metaphase, actively growing roots were subjected to subsequent treatments with 0.625 mM hydroxyurea for 18 h and after 8 h recovery in distilled water with 0.05 % (m/v) colchicine for 8 h. These treatments resulted in 50 % metaphase indices. Synchronized root tips were fixed in 2 % formaldehyde for 10 min and chromosomes were released into a lysis buffer by mechanical homogenisation, producing 5 x 100000 chromosomes from 50 root tips, at average. The isolated chromosomes were morphologically intact and suitable for flow cytometric analysis. Flow karyotypes obtained after the analysis of DAPI-stained chromosomes indicated a possibility to sort at least three different chromosome types.

Česky

Poprvé byla vyvinuta vysoce učinná metoda přípravy intaktních chromozomů ze smrku ztepilého [Picea abies (L.) Karst.]. K akumulaci metafází v meristematických buňkách byly rostoucí kořenové špičky máčeny 18hodin v 0,625mM hydroxymočovině, 8hodin v destilované vodě a 8 hodin v 0,05% (m/v) kolchicinu. Bylo dosaženo 50% metafázního indexu. Synchronizované kořenové špičky byly fixovány 10minut v 2% formaldehydu a chromozomy byly uvolněny do lyzačního pufru mechanickou homogenizací - s průměrným výtěžkem 5x100000 chromozómů na 50 kořenových špiček. Izolované chromozómy byly morfologicky intaktní a vhodné pro analýzu průtokovou cytometrií. Flow karyotyp získaný analýzou chromozómů barvených DAPI ukazuje, že je možné třídit poslední tři odlišné chromozomové typy.