2006
Sensitive Detection and Separation of Fluorescent Derivatives using Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence Detection with 532 nm Nd:YAG Laser
VRÁBEL, Patrik, Petr TÁBORSKÝ, Markéta RYVOLOVÁ, Josef HAVEL, Jan PREISLER et. al.Základní údaje
Originální název
Sensitive Detection and Separation of Fluorescent Derivatives using Capillary Electrophoresis with Laser-Induced Fluorescence Detection with 532 nm Nd:YAG Laser
Název česky
Citlivá detekce a separace fluoreskujících derivátů pomocí kapilární elektroforézy s laserem indukovanou fluorescenční detekcí s 532 nm laserem Nd: YAG
Autoři
VRÁBEL, Patrik (203 Česká republika), Petr TÁBORSKÝ (203 Česká republika), Markéta RYVOLOVÁ (203 Česká republika), Josef HAVEL (203 Česká republika) a Jan PREISLER (203 Česká republika, garant)
Vydání
Journal of Luminescence, Holland, Elsevier, 2006, 0022-2313
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Obor
10406 Analytical chemistry
Stát vydavatele
Nizozemské království
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Odkazy
Impakt faktor
Impact factor: 1.441
Kód RIV
RIV/00216224:14310/06:00015565
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
UT WoS
000235852800021
Klíčová slova anglicky
Electrophoresis; Fluorescence; Derivatization; RBITC; Proteins; Rhodamine; 532 nm Laser.
Štítky
Příznaky
Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 27. 6. 2009 23:55, prof. Mgr. Jan Preisler, Ph.D.
V originále
Capillary Electrophoresis with Laser Induced Fluorescence detection (CELIF) is a powerful tool for separation and sensitive determination of fluorescent compounds. Biologically active compounds, such as amino acids, peptides and proteins may exhibit native fluorescence, which is however often low and/or an expensive laser is required for excitation in UV. Therefore, labeling of the analytes with a fluorescent dye is usually necessary. In this work, home-built CELIF instrument was developed and tuned up using rhodamine-based dyes with diode pumped frequency-doubled continuous wave Nd:YAG excitation laser with feedback power regulation (532 nm). First, the suitability and performance of this type of laser for LIF detection in a separation method was evaluated. Detection limit of 2E-13 M was achieved with rhodamine B, which is comparable to previously described CELIF with Ar+ laser. An exemplary separation of rhodamine dyes is given. Rhodamine based derivatizing agent was chosen for labeling of aminoacids and proteins with derivatization techniques suggested by several groups for fluorescein-based dyes. Derivatization conditions such as solvent, pH, time and temperature of derivatization as well as separation conditions were optimized and examples of electropherograms are presented.
Česky
Metoda kapilární elektroforézy s laserem indukovanou fluorescenční detekcí je silným nástrojem pro separaci a citlivou detekci fluoreskujících látek. Mnohé biologicky aktivní látky, jako jsou například peptidy a proteiny mohou přirozeně fluoreskovat, ovšem nativní fluorescence je často nedostatečná a/nebo je nezbytné využít nákladný laser pro excitaci v UV oblasti záření. Výhodné řešení je potom derivatizovat látky pomocí fluoreskujících činidel exctitovatelných běžnými typy laserů a s vysokým kvantovým výtěžkem. V této práci byl laboratorně sestaven a s využitím rhodaminových barviv odladěn prototyp přístroje pro CELIF s diodově pumpovaným Nd:YAG excitačním laserem se stabilizací zpětnou vazbou a násobičem frekvence 2x (532 nm). Rozsah použití a účinnost tohoto laseru pro CELIF byly vyhodnoceny a otestovány mezi prvními. Detekční limit 2E-13 mol/l byl dosažen pro Rhodamin B, což je ve shodě s výsledky pro běžně používaný Ar-ion laser. Experimenty zahrnují příkladovou separaci a stanovení rhodaminových barviv. Isothiokyanát rhodaminu B byl použit pro derivatizaci aminokyselin, peptidů a malých proteinů za podmínek uváděných bežně pro obdobné činidlo na bázi fluoresceinu. Podmínky pro derivatizační reakci jako vhodné rozpouštědlo, pH, čas a teplota byly optimalizovány a je demonstrována optimalizovaná CELIF fluorescenčně značeného hovězího insulinu.
Návaznosti
| GA203/03/0515, projekt VaV |
| ||
| MSM 143100011, záměr |
|