Isolation of PCR-ready DNA from Mycobacterial cells using magnetic particles

TĚŠÍNSKÁ, Iva, Bohuslav RITTICH, Alena ŠPANOVÁ a Milan BARTOŠ. Isolation of PCR-ready DNA from Mycobacterial cells using magnetic particles. In 11th International Symposium on Separation Sciences ISSS 2005. Pardubice, Česká republika: Univerzita Pardubice, 2005, s. 299-299. ISBN 80-7194-771-7.

Základní údaje

• Originální název: Isolation of PCR-ready DNA from Mycobacterial cells using magnetic particles
• Název česky: Izolace mykobakteriální DNA v kvalitě pro PCR pomocí magnetických částic
• Autoři: TĚŠÍNSKÁ, Iva (203 Česká republika), Bohuslav RITTICH (203 Česká republika, garant), Alena ŠPANOVÁ (203 Česká republika) a Milan BARTOŠ (203 Česká republika).
• Vydání: Pardubice, Česká republika, 11th International Symposium on Separation Sciences ISSS 2005, od s. 299-299, 1 s. 2005.
• Nakladatel: Univerzita Pardubice

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Stať ve sborníku
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14310/05:00012824
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• ISBN: 80-7194-771-7
• Klíčová slova anglicky: Mycobacterium; DNA; PCR
• Štítky: DNA, MYCOBACTERIUM, PCR

Anotace

For this study, chicken erythrocyte DNA and calf liver RNA were used. For both types of nucleic acids, we compared the binding capacity of the following particles: non-magnetic particles based on silica, magnetic particles based on ferrite, and magnetic particles P(HEMA-co-GMA) microspheres covered with carboxylic groups. A binding buffer containing 8% PEG and 2M NaCl (final concentration) was shown to be the most appropriate combination for further studies. Separated DNA was eluted using TE buffer. The knowledge acquired was used for the development of a PCR-ready mycobacterial DNA isolation technique. Mycobacterial DNA from the eluate was detected by amplification of the dnaJ gene. The primers Multidnajf and MultidnaJr amplify a product 140 bp long. The sensitivity of the reaction is 5 . 10-3 ng/ul (5.95. 10+2 copies).

Anotace česky

Byly stanoveny vazebné kapacity DNA z kuřecích erythrocytů a RNA z hovězích jater na následující částice: silikagel, magnetické feritové částice a magnetické P(HEMA-co-GMA)mikročástice obsahující karboxylové skupiny. Jako nejvhodnější vazebný pufr byl zjištěn 8% PEG a 2M NaCl (konečná koncentrace). Z částic byla DNA eluována pomocí TE pufru. Získané znalosti byly využity při izolaci mykobakteriální DNA v kvalitě vhodné pro PCR. Mykobakteriální DNA byla detekována amplifikací genu dnaj. Pomocí primerů Multidnajf a MultidnaJr byl amplifikován produkt o velikosti 140 bp. Citlivost stanovení byla 5,0 x 10-3 ng/ul (5,95 x 10+2 kopií buněk).

Návaznosti

• GA203/05/2256, projekt VaV: Název: Magnetické hydrofilní polymerní mikročástice reagující na vnější stimuly pro lékařství a bioinženýrství

Investor: Grantová agentura ČR, Magnetické hydrofilní polymerní mikročástice reagující na vnější stimuly pro lékařství a bioinženýrství

• MZE0002716201, záměr: Název: Zdravá zvířata a bezpečné potraviny jako základ pro zdraví lidí