Studium genové exprese u T. pallidum.

MATĚJKOVÁ, Petra, David ŠMAJS, S.J. NORRIS a G.M. WEINSTOCK. Studium genové exprese u T. pallidum. In Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů. 2005. vyd. Brno: Přírodovědecká fakulta MU, 2005, s. 11. ISBN 80-210-3635-4.

Základní údaje

Originální název

Studium genové exprese u T. pallidum.

Název anglicky

Gene expression profiling in T. pallidum

Autoři

MATĚJKOVÁ, Petra, David ŠMAJS, S.J. NORRIS a G.M. WEINSTOCK

Vydání

2005. vyd. Brno, Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů, s. 11-11, 2005

Nakladatel

Přírodovědecká fakulta MU

---

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Stať ve sborníku

Obor

Genetika a molekulární biologie

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Organizační jednotka

Lékařská fakulta

ISBN

80-210-3635-4

Klíčová slova anglicky

Treponema pallidum subsp. pallidum; gene expression profiling; BAC clones

Štítky

BAC clones, gene expression profiling, Treponema pallidum subsp. pallidum

---

Anotace

V originále

Spirocheta Treponema pallidum subsp. pallidum je původcem venerické syfilis, vysoce invazivního onemocnění postihujícího v pozdním stadiu systémově celý organismus. Nemožnost kontinuální kultivace v in vitro podmínkách vyžaduje užití genomických přístupů pro výzkum tohoto neobvyklého patogenu. Byla připravena BAC knihovna chromozomální DNA T. pallidum v E. coli. 19 klonů této knihovny představuje minimální set obsahující 99,8 % předpovězených genů (ORF). Byla stanovena exprese genů T. pallidum v E. coli. Expresní profil genů v BAC knihovně představuje první krok pro studium regulace genové exprese genů T. pallidum. 5 treponemálních genů kódujících proteiny s domnělou regulační funkcí bylo naklonováno do expresních vektorů pBAD kompatibilních s replikačním systémem BAC. V expresním vektoru pBAD jsou tyto geny pod kontrolou arabinózového promotoru, který umožňuje regulovat jejich expresi pomocí hladiny arabinózy v kultivačním mediu. Tyto vektory byly transformovány do minimální sady BAC knihovny. Celková RNA celé sady transformované vektorem s domnělým transkripčním regulátorem byla porovnána s relevantní kontrolou s vektorem bez inzertu metodami DNA microarray hybridizace na čipu T. pallidum a kvantitativní PCR. Byly vyšetřeny geny rpoN, fhlA, hisK, soj a troR. Proteiny RpoN, FhlA a HisK byly potvrzeny jako pozitivní regulátory a produkt genu soj jako negativní regulátor. U genu troR nebyla potvrzena jeho negativní regulační funkce. Byla také vyšetřena RNA izolovaná z časově omezené kultivace treponem na tkáňových kulturách králičích epiteliálních buněk a z experimentálních lézí na králičí kůži. RNA z takto získaných organismů byla podrobena expresní analýze metodou kvantitativní PCR a výsledky byly porovnány s expresním profilem treponem izolovaných z králičích testes.

Anglicky

Five treponemal genes with putative regulatory functions were cloned and expressed in the BAC library of T. pallidum DNA in the E. coli. Total RNA was isolated from the individual clones of the library and was compared to the control RNA. The regulatory function was identified for RpoN, FhlA and HisK proteins.

---

Návaznosti

GA310/04/0021, projekt VaV	Název: Postgenomické studie syfilitické spirochety Treponema pallidum Investor: Grantová agentura ČR, Postgenomické studie syfilitické spirochety Treponema pallidum
MSM0021622415, záměr	Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací
NI7351, projekt VaV	Název: Komparativní genomika patogenních spirochet rodu Treponema: cesta k sekvenčně specifické diagnostice Investor: Ministerstvo zdravotnictví ČR, Komparativní genomika patogenních spirochet rodu Treponema: cesta k sekvenčně specifické diagnostice