2006
Stanovení aktivity isoformy CYP450 2C9 pomocí micelární elektrokinetické chromatografie
KONEČNÝ, Jiří a Zdeněk GLATZZákladní údaje
Originální název
Stanovení aktivity isoformy CYP450 2C9 pomocí micelární elektrokinetické chromatografie
Název česky
Stanovení aktivity isoformy CYP450 2C9 pomocí micelární elektrokinetické chromatografie
Název anglicky
Cytochrome P450 2C9 Isoform Activity Determination by Micelar Elektrokinetic Chromatography
Autoři
KONEČNÝ, Jiří a Zdeněk GLATZ
Vydání
Brno, X. pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů. s. 71-71, 2006
Nakladatel
Masarykova univerzita
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-3942-6
Klíčová slova anglicky
CE; MEKC; cytochrome P450 2C9; metabolism
Štítky
Změněno: 14. 3. 2007 03:18, Olga Křížová
V originále
Nejčastěji je v dnešní době ke studiu metabolismu cizorodých látek používána kapalinová chromatografie (HPLC) ve spojení s UV (LC-UV) a fluorescenční (LC-fluorescence) detekcí, ojediněle pak ve spojení s hmotnostní spektrometrií (LC-MS). Tyto metody jsou však náročnější na objemy chemikálií a vzorků nutných k úspěšnému provedení analýzy. Výhodou kapilární elektroforézy (CE) je její časová nenáročnost a hlavně i malá spotřeba vzorku, která je především důležitá v případě enzymových preparátů, substrátů, případně inhibitorů. Automatizace všech kroků vlastního stanovení navíc eliminuje experimentální chyby. Micelární elektrokinetická chromatografie (MEKC) patří mezi nejpoužívanější módy CE. Její velkou výhodou oproti HPLC je snadnější příprava vzorků nevyžaduje předpřípravu biologických vzorků jako je např. extrakce. Cytochrom P450 je v současné době označení pro rozsáhlou skupinu hemoproteinů, přičemž tyto izoformy zřejmě pochází ze společného proteinu, ze kterého se vytvořily během biologické evoluce. V současnosti je známo více než 270 různých genových rodin cytochromu P450, z nichž 18 je prokázáno u savců, u nichž se podílejí na biosyntéze a metabolismu sterolů a steroidních hormonů, na metabolismu různých lipidických biofaktorů včetně necyklických uhlovodíků - eikosanů, vitamínu D3 a retinoidů. Hlavní funkcí, kterou plní cytochromy P450 v organismu, je oxidativní metabolismus cizorodých látek. Pro sledování metabolické aktivity isoformy 2C9 cytochromu P450 se využívají tolbutamid a diclofenac a jejich hydroxylace na 4-hydroxy- tolbutamid resp. 4-hydroxydiclofenac.V návaznosti na tuto skutečnost byla vypracovaná metoda pro stanovení aktivity mikrosomálního cytochromu P450 a jeho isoformy 2C9 pomocí MEKC v off-line módu. Vypracovaná metoda je použitelná pro stanovení obou substrátů a jejich metabolitů pouze s rozdílem ve výběru vlnové délky při detekci. Její nezanedbatelnou výhodou oproti klasickému stanovení pomocí HPLC je odstranění extrakčního kroku z přípravy vzorku pro analýzu.
Anglicky
The aim of the work was the developing the method for cytochrome P450 2C9 isoform activity determination by micelar elektrokinetic chromatography.
Návaznosti
| GA203/06/0047, projekt VaV |
| ||
| LC06023, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622413, záměr |
|