2006
Molekulárně-biologická diagnostika spirochety Treponema pallidum v biologickém materiálu.
FLASAROVÁ, Magdalena, Petra MATĚJKOVÁ, David ŠMAJS a Vladana WOZNICOVÁZákladní údaje
Originální název
Molekulárně-biologická diagnostika spirochety Treponema pallidum v biologickém materiálu.
Název česky
Molekulárně-biologická diagnostika spirochety Treponema pallidum v biologickém materiálu.
Název anglicky
Molecular detection and subtyping of Treponema pallidum subsp. pallidum in clinical specimens
Autoři
FLASAROVÁ, Magdalena (203 Česká republika), Petra MATĚJKOVÁ (203 Česká republika), David ŠMAJS (203 Česká republika, garant) a Vladana WOZNICOVÁ (203 Česká republika)
Vydání
Brno, X. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů. Sborník příspěvků. s. 7-7, 2006
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
Genetika a molekulární biologie
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14110/06:00016052
Organizační jednotka
Lékařská fakulta
ISBN
80-210-3942-6
Klíčová slova anglicky
Treponema pallidum subsp. pallidum; detection in clinical specimens; molecular typing; mucocutaneous swabs.
Štítky
Změněno: 6. 12. 2006 13:04, prof. MUDr. David Šmajs, Ph.D.
V originále
Prováděli jsme izolaci a detekci treponemální DNA (mikroorganismu Treponema pallidum subsp. pallidum) z různých klinických materiálů. Získaný biologický materiál jsme vyšetřili u pacientů s podezřením na syfilis, a to ve stádiu primárním, sekundárním, časně latentním a pozdně latentním včetně kongenitální syfilis. Klinické vzorky zahrnovaly kožní a slizniční stěry, séra, krevní sraženiny, likvory a tkáně. Celkem jsme vyšetřili 179 klinických vzorků, z toho 141 sér, 26 stěrů, 10 krevních sraženin, 1 likvor a 1 tkáň. Z tohoto výčtu vzorků jsme nalezli 7 pozitivních stěrů od 4 pacientů ve stádiu primární a sekundární syfilis. Dále jsme u novorozence s kongenitální syfilis prokázali tyto pozitivní vzorky: 1 likvor, 1 sérum a 1 stěr. U všech vyšetřovaných vzorků jsme provedli detekci treponemální DNA pomocí dvoukrokové (nested) PCR (polymerázové řetězové reakce) na gen tmpC (TP0319, kódující membránový lipoprotein). PCR produkty (z genu TP0319) o velikosti 451 bp jsme štěpili pomocí 3 restriktáz, Sac I, Nhe I, Dde I, k odlišení jednotlivých kmenů Treponema pallidum. Pro přesnou kmenovou typizaci jsme amplifikovali geny TP0548, TP0136, TP0319 a vzniklé PCR produkty sekvenovali.Výsledky sekvenací ve dvou případech ukázaly výskyt kmene sekvenčně totožného s kmenem SS14 a v dalších dvou případech jsme nalezli sekvenční změny v lokusech TP0548 a TP0136, které prokázaly výskyt unikátních syfilitických kmenů, doposud nepopsaných u Treponema pallidum subsp. pallidum. U jednoho vyšetřovaného novorozence jsme porovnali počet molekul DNA ve 2 různých biologických materiálech (v séru a v likvoru).
Anglicky
A nested PCR amplification protocol detecting tmpC gene (TP0319, encoding putative membrane lipoprotein) was used for detection of Treponema pallidum subsp. pallidum in the clinical material. We tested 138 samples of blood sera of 111 adult patients in primary, secondary, early and late latent stages of the infection as well as of patients suspected of syphilis. T. p. pallidum DNA was not detected in any of the analyzed sera samples. Out of 11 mucocutaneous swabs (7 genital and 4 pharyngeal ones), 6 from 3 patients with primary or secondary syphilis were positive. In addition, one skin swab was positive in patient with early congenital syphilis. Sera and cerebrospinal fluid samples from this patient were also positive. DNA sequencing of genes TP0136 and TP0548 in the positive samples revealed two patients with DNA sequence identical to T. p. pallidum strain SS14 and two unique, not yet known T. p. pallidum strains. The advances in molecular typing of T. p. pallidum in clinical material will become important for epidemiologic consequences and for clinical discrimination between reinfection and reactivation of the syphilitic process.
Návaznosti
| GA310/04/0021, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622415, záměr |
| ||
| NR8967, projekt VaV |
|