2006
Detekce Treponema pallidum subsp. pallidum v biologickém materiálu, výhledy pro epidemiologii syfilis
FLASAROVA, Magdalena, Petra MATĚJKOVÁ, David ŠMAJS, Vladana WOZNICOVÁ, Monika DVOŘÁKOVÁ-HEROLDOVÁ et. al.Základní údaje
Originální název
Detekce Treponema pallidum subsp. pallidum v biologickém materiálu, výhledy pro epidemiologii syfilis
Název česky
Detekce Treponema pallidum subsp. pallidum v biologickém materiálu, výhledy pro epidemiologii syfilis
Název anglicky
Detection of Treponema pallidum subsp. pallidum in clinical material, epidemiologic consequences
Autoři
Vydání
Brno, XXI. Pečenkovy epidemiologické dny. od s. S1, 1 s. 2006
Nakladatel
Konvoj, s.r.o.
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
Genetika a molekulární biologie
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Organizační jednotka
Lékařská fakulta
ISBN
80-7302-114-5
Klíčová slova anglicky
Treponema pallidum subsp. pallidum; detection in the clinical material; molecular typing; mucocutaneous swabs
Změněno: 26. 6. 2009 16:17, prof. MUDr. David Šmajs, Ph.D.
V originále
V této práci jsme se zaměřili na molekulárněbiologickou diagnostiku spirochety Treponema pallidum, a to v různém biologickém materiálu. Vyšetřované klinické vzorky pocházely od pacientů ve stádiu primárním, sekundárním, časně latentním a pozdně latentním včetně kongenitální syfilis. Biologické vzorky zahrnovaly kožní a slizniční stěry, plnou krev, séra, krevní sraženiny, likvory a tkáně. Celkem jsme vyšetřili 219 klinických vzorků, z toho 142 sér, 42 stěrů, 32 sraženin, 1 likvor, 1 tkáň a 1 plnou krev. Z tohoto výčtu vzorků jsme nalezli 9 pozitivních stěrů od 6 dospělých pacientů ve stádiu primární a sekundární syfilis. U novorozence s kongenitální syfilis jsme prokázali tyto pozitivní vzorky: 1 likvor, 1 sérum a 1 stěr. U všech vyšetřovaných vzorků jsme provedli detekci treponemální DNA pomocí dvoukrokové (nested) PCR na gen tmpC (TP0319, kódující membránový lipoprotein). PCR produkty (z genu TP0319) o velikosti 451 bp jsme štěpili pomocí 3 restriktáz (Sac I, Nhe I, Dde I), k odlišení jednotlivých kmenů Treponema pallidum. Pro přesnou kmenovou typizaci jsme amplifikovali geny TP0548, TP0136, TP0319 a vzniklé PCR produkty jsme sekvenovali. Výsledky sekvenací ve dvou případech ukázaly výskyt kmene sekvenčně totožného s kmenem SS14 a v dalších dvou případech jsme nalezli sekvenční změny v lokusech TP0548 a TP0136, které prokázaly výskyt unikátních syfilitických kmenů, doposud nepopsaných u Treponema pallidum subsp. pallidum. U jednoho vyšetřovaného novorozence jsme porovnali počet molekul DNA ve 2 různých biologických materiálech (v séru a likvoru). Počty treponemální DNA byly shodné a činily asi 100 000 treponemálních molekul DNA v 1 mikrolitru vzorku. Toto ukazuje na skutečnost, že u kongenitální syfilis je počet mikroorganismů v séru a likvoru srovnatelný a nápadně vyšší než u dospělých pacientů. Molekulárněgenetická detekce syfilis byla u vyšetřovaných dospělých pacientů možná jen u slizničních (faryngeálních a genitálních) stěrů a dále z 1 plné krve. Původce syfilis Treponema pallidum subsp. pallidum nebyl v séru dospělých pacientů detegován. Závěrem lze konstatovat, že molekulární typizace a identifikace jednotlivých kmenů a izolátů T. p. pallidum přispěje zásadně k rozvoji epidemiologie syfilis a přinese i možnost rozlišení mezi reinfekcí a reaktivací syfilitického procesu.
Anglicky
The PCR amplification protocol detecting tmpC gene (TP0319, encoding putative membrane lipoprotein) was used for detection of Treponema pallidum subsp. pallidum in the clinical material. T. p. pallidum DNA was not detected in any of the analyzed sera samples. Out of 11 mucocutaneous swabs (7 genital and 4 pharyngeal ones), 6 from 3 patients with primary or secondary syphilis were positive. In addition, one skin swab was positive in patient with early congenital syphilis. Sera and cerebrospinal fluid samples from this patient were also positive. DNA sequencing of genes TP0136 and TP0548 in the positive samples revealed two patients with DNA sequence identical to T. p. pallidum strain SS14 and two unique, not yet known T. p. pallidum strains. The advances in molecular typing of T. p. pallidum in clinical material will become important for epidemiologic consequences and for clinical discrimination between reinfection and reactivation of the syphilitic process.
Návaznosti
| GA310/04/0021, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622415, záměr |
| ||
| NR8967, projekt VaV |
|