a 2007

Změny obsahu lysozymu a proteinového spektra hemolymfy zavíječe voskového (Galleria mellonella L.) během vývoje

MANDÁTOVÁ, Veronika a Pavel HYRŠL

Základní údaje

Originální název

Změny obsahu lysozymu a proteinového spektra hemolymfy zavíječe voskového (Galleria mellonella L.) během vývoje

Název česky

Změny obsahu lysozymu a proteinového spektra hemolymfy zavíječe voskového (Galleria mellonella L.) během vývoje

Název anglicky

Lysozyme and protein profile changes in the hemolymph of the wax moth (Galleria mellonella L.) during the development

Autoři

Vydání

Zoologické dny Brno 2007, 2007

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Konferenční abstrakt

Obor

30105 Physiology

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

ISBN

978-80-903329-7-3

Klíčová slova anglicky

Galleria mellonella; hemolymph; lysozyme; proteins

Štítky

Změněno: 18. 5. 2011 10:42, doc. RNDr. Pavel Hyršl, Ph.D.

Anotace

ORIG EN

V originále

Housenky (larvy) zavíječe voskového (Galleria mellonella L., Lepidoptera, Pyralidae) byly chovány ve tmě při teplotě 30 C na umělé půdě podle Haydaka. Celkový larvální vývoj trvá přibližně 32 dní a dělí se do sedmi instarů. Následuje stádium kukly, ze kterého se líhnou dospělci za 8-10 dní, pouze u kukel lze rozlišit pohlaví. Během vývoje byla sledována biometrická data včetně fotodokumentace. Pro analýzu hemolymfy byly použity vzorky z každého vývojového dne předposledního a posledního (VI. - 3 dny a VII.- 8 dní) larválního instaru a začátek, střed a konec stádia kukly. V nižších instarech nebylo možné odebrat dostatečné množství hemolymfy vzhledem k malé velikosti housenek. Cílem práce bylo porovnat množství lysozymu v hemolymfě a stanovit rozdíly v proteinovém spektru hemolymfy posledních dvou larválních instarů a kukel různého stáří. Koncentrace lysozymu byla stanovena metodou radiální difúze v agaróze využívající bakterii Micrococcus luteus, která je citlivá na působení lysozymu. Průměr difúzní zóny je přímo úměrný bakteriolytické aktivitě vzorku a po přepočtu podle kalibrační křivky je množství lysozymu vyjádřeno v mg/ml hemolymfy. Dále byla odebraná hemolymfa zpracována metodikou SDS-PAGGE (polyakrylamidová gradientová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného). Gely obarvené stříbrem byly vyhodnoceny na videodenzitometru v programu Molecular Analyst. K výrazným změnám v obsahu lysozymu během larválního vývoje nedochází. Jeho množství se pohybuje během celého vývoje kolem 0,4 mg/ml hemolymfy. V pupálním vývoji bylo množství naměřeného lysozymu menší, nejnižší koncentrace lysozymu byla zjištěna na začátku stadia kukly. Směrem ke konci pupálního stadia množství lysozymu rostlo. V proteinovém spektru hemolymfy bylo detekováno 12 dobře rozlišitelných proteinových frakcí. Nejvýrazněji jsou zastoupeny lipophoriny (apolipophorin-I a apolipophorin-III) a zásobní proteiny, jejichž množství (koncentrace) se zvyšuje se stářím larev.

Anglicky

Housenky (larvy) zavíječe voskového (Galleria mellonella L., Lepidoptera, Pyralidae) byly chovány ve tmě při teplotě 30 C na umělé půdě podle Haydaka. Celkový larvální vývoj trvá přibližně 32 dní a dělí se do sedmi instarů. Následuje stádium kukly, ze kterého se líhnou dospělci za 8-10 dní, pouze u kukel lze rozlišit pohlaví. Během vývoje byla sledována biometrická data včetně fotodokumentace. Pro analýzu hemolymfy byly použity vzorky z každého vývojového dne předposledního a posledního (VI. - 3 dny a VII.- 8 dní) larválního instaru a začátek, střed a konec stádia kukly. V nižších instarech nebylo možné odebrat dostatečné množství hemolymfy vzhledem k malé velikosti housenek. Cílem práce bylo porovnat množství lysozymu v hemolymfě a stanovit rozdíly v proteinovém spektru hemolymfy posledních dvou larválních instarů a kukel různého stáří. Koncentrace lysozymu byla stanovena metodou radiální difúze v agaróze využívající bakterii Micrococcus luteus, která je citlivá na působení lysozymu. Průměr difúzní zóny je přímo úměrný bakteriolytické aktivitě vzorku a po přepočtu podle kalibrační křivky je množství lysozymu vyjádřeno v mg/ml hemolymfy. Dále byla odebraná hemolymfa zpracována metodikou SDS-PAGGE (polyakrylamidová gradientová gelová elektroforéza v prostředí dodecylsulfátu sodného). Gely obarvené stříbrem byly vyhodnoceny na videodenzitometru v programu Molecular Analyst. K výrazným změnám v obsahu lysozymu během larválního vývoje nedochází. Jeho množství se pohybuje během celého vývoje kolem 0,4 mg/ml hemolymfy. V pupálním vývoji bylo množství naměřeného lysozymu menší, nejnižší koncentrace lysozymu byla zjištěna na začátku stadia kukly. Směrem ke konci pupálního stadia množství lysozymu rostlo. V proteinovém spektru hemolymfy bylo detekováno 12 dobře rozlišitelných proteinových frakcí. Nejvýrazněji jsou zastoupeny lipophoriny (apolipophorin-I a apolipophorin-III) a zásobní proteiny, jejichž množství (koncentrace) se zvyšuje se stářím larev.