TOLAROVÁ, Soňa, Pavel HYRŠL and Monika DUŠKOVÁ. Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence (Bioluminescent determination of bacteriolytic complement activity of different vertebrates). In Zoologické dny Brno 2007. 2007. ISBN 978-80-903329-7-3.
Other formats:   BibTeX LaTeX RIS
Basic information
Original name Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence
Name in Czech Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence
Name (in English) Bioluminescent determination of bacteriolytic complement activity of different vertebrates
Authors TOLAROVÁ, Soňa, Pavel HYRŠL and Monika DUŠKOVÁ.
Edition Zoologické dny Brno 2007, 2007.
Other information
Original language Czech
Type of outcome Conference abstract
Field of Study 30102 Immunology
Country of publisher Czech Republic
Confidentiality degree is not subject to a state or trade secret
Organization unit Faculty of Science
ISBN 978-80-903329-7-3
Keywords in English complement; bioluminescence
Tags bioluminescence, complement
Changed by Changed by: doc. RNDr. Pavel Hyršl, Ph.D., učo 9982. Changed: 18/5/2011 10:44.
Abstract
Komplementový systém je humorální složka nespecifické imunity typická pro obratlovce. Je to soubor přibližně 30 sérových proteinů, které mohou být volné nebo membránově vázané. Jednotlivé proteiny se v séru vyskytují v inaktivní formě, avšak specifický signál způsobuje aktivaci první složky, která spouští kaskádu reakcí vedoucích k aktivaci složek následujících. Konečným výsledkem kaskády je sestavení terminálního komplexu MAC (membrane attack complex), který vytváří póry v membráně cílové buňky a způsobuje tak její poškození a lyzi. Komplement může být aktivován cestou klasickou (vyžadující protilátku vázanou k povrchu patogenu), alternativní (aktivována povrchovými molekulami patogenu) nebo lektinovou. Lektinová cesta je spuštěna živočišnými lektiny a je typická pouze pro savce, u ryb definována nebyla. Mezi nejdůležitější funkce komplementu patří bakteriolytická aktivita (zejména proti G- bakteriím), účast při regulaci zánětu, opsonizace cizorodých částic, čímž je usnadněna jejich fagocytóza. Byla použita metoda založená na principu bioluminiscence, kdy dochází k reakci mezi enzymem a substrátem. Tato reakce vyžaduje přítomnost ATP, který je produkován pouze živými buňkami. Pro stanovení byl použit rekombinantní bakteriální kmen E. coli, do jehož plasmidu byly vloženy geny kódující enzym luciferázu a jeho substrát luciferin. Naměřené hodnoty bioluminiscence bakterií jsou úměrné jejich viabilitě. Jako vzorky pro stanovení komplementu byla použita krevní plasma nebo sérum kapra, lína, myši, morčete a člověka. Komplement obsažený ve vzorku lyzuje bioluminiscenční bakterie a výsledná aktivita komplementu je odečítána z křivky viability bakterií. Každý živočišný druh vyžaduje specifickou teplotu a čas inkubace vzorků. V dalších experimentech bude spektrum sledovaných živočišných druhů ještě rozšířeno. Cílem je optimalizace této metody pro porovnání aktivity komplementu u vybraných druhů obratlovců a srovnání aktivity klasické a alternativní cesty.
Abstract (in English)
Komplementový systém je humorální složka nespecifické imunity typická pro obratlovce. Je to soubor přibližně 30 sérových proteinů, které mohou být volné nebo membránově vázané. Jednotlivé proteiny se v séru vyskytují v inaktivní formě, avšak specifický signál způsobuje aktivaci první složky, která spouští kaskádu reakcí vedoucích k aktivaci složek následujících. Konečným výsledkem kaskády je sestavení terminálního komplexu MAC (membrane attack complex), který vytváří póry v membráně cílové buňky a způsobuje tak její poškození a lyzi. Komplement může být aktivován cestou klasickou (vyžadující protilátku vázanou k povrchu patogenu), alternativní (aktivována povrchovými molekulami patogenu) nebo lektinovou. Lektinová cesta je spuštěna živočišnými lektiny a je typická pouze pro savce, u ryb definována nebyla. Mezi nejdůležitější funkce komplementu patří bakteriolytická aktivita (zejména proti G- bakteriím), účast při regulaci zánětu, opsonizace cizorodých částic, čímž je usnadněna jejich fagocytóza. Byla použita metoda založená na principu bioluminiscence, kdy dochází k reakci mezi enzymem a substrátem. Tato reakce vyžaduje přítomnost ATP, který je produkován pouze živými buňkami. Pro stanovení byl použit rekombinantní bakteriální kmen E. coli, do jehož plasmidu byly vloženy geny kódující enzym luciferázu a jeho substrát luciferin. Naměřené hodnoty bioluminiscence bakterií jsou úměrné jejich viabilitě. Jako vzorky pro stanovení komplementu byla použita krevní plasma nebo sérum kapra, lína, myši, morčete a člověka. Komplement obsažený ve vzorku lyzuje bioluminiscenční bakterie a výsledná aktivita komplementu je odečítána z křivky viability bakterií. Každý živočišný druh vyžaduje specifickou teplotu a čas inkubace vzorků. V dalších experimentech bude spektrum sledovaných živočišných druhů ještě rozšířeno. Cílem je optimalizace této metody pro porovnání aktivity komplementu u vybraných druhů obratlovců a srovnání aktivity klasické a alternativní cesty.
PrintDisplayed: 31/5/2024 01:06