Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové
histidinkinázy CKI1

D 2007

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO et. al.

Základní údaje

Originální název

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

Název anglicky

Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1

Autoři

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA

Vydání

1. vyd. Olomouc (ČR), Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti, s. 64-64, 2007

Nakladatel

Česká společnost experimentální biologie rostlin

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Stať ve sborníku

Obor

Genetika a molekulární biologie

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Odkazy

URL

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

ISBN

1213-6670

Klíčová slova anglicky

cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification

Štítky

CKI1, cytokinins, HISTIDINE KINASE, purification, receiver domain

Změněno: 16. 7. 2008 13:55, Mgr. Petr Bureš

Anotace

V originále

Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.

Návaznosti

LC06034, projekt VaV

Název: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

MSM0021622415, záměr

Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Citovat

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1. In Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti. 1. vyd. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, s. 64. ISBN 1213-6670.

@inproceedings{744196,
   author = {Pekárová, Blanka and Borkovcová, Petra and Brzobohatý, Břetislav and Urbaníková, Ľubica and Hejátko, Jan and Janda, Lubomír},
   address = {Olomouc (ČR)},
   booktitle = {Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti},
   edition = {1.},
   keywords = {cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification},
   language = {cze},
   location = {Olomouc (ČR)},
   isbn = {1213-6670},
   pages = {64-64},
   publisher = {Česká společnost experimentální biologie rostlin},
   title = {Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1},
   url = {http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007},
   year = {2007}
}

TY  - JOUR
ID  - 744196
AU  - Pekárová, Blanka - Borkovcová, Petra - Brzobohatý, Břetislav - Urbaníková, Ľubica - Hejátko, Jan - Janda, Lubomír
PY  - 2007
TI  - Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1
PB  - Česká společnost experimentální biologie rostlin
CY  - Olomouc (ČR)
SN  - 12136670
KW  - cytokinins
KW  - histidine kinase
KW  - CKI1
KW  - receiver domain
KW  - purification
UR  - http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007
N2  - Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.
ER  -

PEKÁROVÁ, Blanka, Petra BORKOVCOVÁ, Břetislav BRZOBOHATÝ, Ľubica URBANÍKOVÁ, Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1. In \textit{Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti}. 1. vyd. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, s.~64. ISBN~1213-6670.

Podrobný výpis o publikaci