Využití long-oligonucleotide arrayCGH v diagnostice leukémií

KOZUBÍKOVÁ, Kateřina, Boris TICHÝ, Dita MENTZLOVÁ, Jiří MAYER, Dana DVOŘÁKOVÁ a Šárka POSPÍŠILOVÁ. Využití long-oligonucleotide arrayCGH v diagnostice leukémií. In XXX. Brněnské onkologické dny s XX. Konferencí pro sestry a laboranty. první. Brno: Masarykův onkologický ústav v Brně, 2006, s. 282-282. ISBN 80-86793-06-0.

Základní údaje

• Originální název: Využití long-oligonucleotide arrayCGH v diagnostice leukémií
• Název česky: Využití long-oligonucleotide arrayCGH v diagnostice leukémií
• Název anglicky: The use of long-oligonucleotide arrayCGH in leukemia diagnostics
• Autoři: KOZUBÍKOVÁ, Kateřina, Boris TICHÝ, Dita MENTZLOVÁ, Jiří MAYER, Dana DVOŘÁKOVÁ a Šárka POSPÍŠILOVÁ.
• Vydání: první. Brno, XXX. Brněnské onkologické dny s XX. Konferencí pro sestry a laboranty, od s. 282-282, 1 s. 2006.
• Nakladatel: Masarykův onkologický ústav v Brně

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Stať ve sborníku
• Obor: 30200 3.2 Clinical medicine
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Lékařská fakulta
• ISBN: 80-86793-06-0
• Klíčová slova anglicky: B-CLL long-oligonucleotide arrayCGH
• Štítky: B-CLL long-oligonucleotide arrayCGH

Anotace

Většina nádorů je provázena abnormalitami genomu nádorových buněk jako jsou delece a amplifikace úseků DNA, případně přestavby chromozomů. Některé z těchto změn jsou specifické pro určité typy nádorů a jsou jednou z příčin vzniku onemocnění, jiné vznikají sekundárně v důsledku neregulované proliferace buněk, u kterých selhaly opravné mechanismy. Znalost těchto aberací má velký význam pro určení prognózy i výběr terapeutického plánu a jejich detekce se proto stala nedílnou součástí diagnostických schémat onkologických onemocnění. CGH (komparativní genomová hybridizace) je založena na současné hybridizaci dvou fluorescenčně značených vzorků genomové DNA (referenčníhoa vyšetřovaného) na metafázní chromozomy. Delece či amplifikace se pak projeví jako snížení resp. zvýšení intenzity signálu vyšetřovaného vzorku v určité oblasti chromozomu. Kompletní znalost sekvence lidského genomu otevřela cestu novému přístupu arrayCGH (CGH čipy). U CGH čipů jsou jako sondy používány reprezentativní úseky chromozomů se známou pozicí imobilizované na pevném nosiči, stejně jako u expresích DNA čipů. Pro přípravu CGH čipů existuje více přístupů. Tyto se liší typem použitých sond: velké inzerty genomických klonů jako jsou bakteriální arteficiální chromozomy (BAC) nebo méně komplexní nukleové kyseliny, jako jsou cDNA, produkty PCR reakce a oligonukleotidy. Nejpespektivnější technikou jsou arrayCGH připravované in situ syntézou oligonukleotidů, které nabízejí současně vysoké rozlišení a flexibilitu. Návrh čipu lze přizpůsobit požadované aplikaci, pro screening lze použít sondy rovnoměrně pokrývající celý genom, pro konkrétní diagnostické nebo výzkumné potřeby lze zvýšit počet specifických oligonukleotidů pro určité úseky genomu a tím zvýšit rozlišení čipu pro požadovanou oblast. Pomocí CGH čipů jsme vyšetřili vzorky pacientů s chronickou lymfatickou leukémií (CLL), u kterých byla dříve provedena cytogenetická analýza. Aberace zjištěné v našem souboru pacientů zahrnovaly např. trizomii chromozomu 12, deleci 13q14 nebo 17p13.1 K vyšetření jsme použili HumanGenome CGH Microarray 44B obsahující asi 44.000 ologonukleotidů o délce 60 bazí navržených pro rovnoměrné pokrytí celého gešnomu. Průměrná vzdálenost mezi jednotlivými sondami v genomu je přibližně 35 kb. Většina sond je navržena do kódujících oblastí genomu, menší část hybridizuje s intergenovými úseky DNA. Sondy jsou syntetizovány in-situ na čipu metodou SurePrint technology, která využívá k depozici nukleotidů ink-jet metodu. Výsledky analýzy CGH čipů nejenže potvrdily cytogenetická data, ale zároveň odhalily další aberace genomu, např. delece 18q nebo delece chromozomu X u jednoho z pacientů. Dokázali jsme, že arrayCGH jsou vhodkým rozšířením současných cytogenetických postupů, především jako metoda screeningu genomových aberací s velmi dobrou dchopností jejich lokalizace. Lze očekávat, že CGH čipy najdou velmi rychle uplatnění nejen v lékařském výzkumu, ale i onkologické a prenatální diagnostice.

Anotace anglicky

Většina nádorů je provázena abnormalitami genomu nádorových buněk jako jsou delece a amplifikace úseků DNA, případně přestavby chromozomů. Některé z těchto změn jsou specifické pro určité typy nádorů a jsou jednou z příčin vzniku onemocnění, jiné vznikají sekundárně v důsledku neregulované proliferace buněk, u kterých selhaly opravné mechanismy. Znalost těchto aberací má velký význam pro určení prognózy i výběr terapeutického plánu a jejich detekce se proto stala nedílnou součástí diagnostických schémat onkologických onemocnění. CGH (komparativní genomová hybridizace) je založena na současné hybridizaci dvou fluorescenčně značených vzorků genomové DNA (referenčníhoa vyšetřovaného) na metafázní chromozomy. Delece či amplifikace se pak projeví jako snížení resp. zvýšení intenzity signálu vyšetřovaného vzorku v určité oblasti chromozomu. Kompletní znalost sekvence lidského genomu otevřela cestu novému přístupu arrayCGH (CGH čipy). U CGH čipů jsou jako sondy používány reprezentativní úseky chromozomů se známou pozicí imobilizované na pevném nosiči, stejně jako u expresích DNA čipů. Pro přípravu CGH čipů existuje více přístupů. Tyto se liší typem použitých sond: velké inzerty genomických klonů jako jsou bakteriální arteficiální chromozomy (BAC) nebo méně komplexní nukleové kyseliny, jako jsou cDNA, produkty PCR reakce a oligonukleotidy. Nejpespektivnější technikou jsou arrayCGH připravované in situ syntézou oligonukleotidů, které nabízejí současně vysoké rozlišení a flexibilitu. Návrh čipu lze přizpůsobit požadované aplikaci, pro screening lze použít sondy rovnoměrně pokrývající celý genom, pro konkrétní diagnostické nebo výzkumné potřeby lze zvýšit počet specifických oligonukleotidů pro určité úseky genomu a tím zvýšit rozlišení čipu pro požadovanou oblast. Pomocí CGH čipů jsme vyšetřili vzorky pacientů s chronickou lymfatickou leukémií (CLL), u kterých byla dříve provedena cytogenetická analýza. Aberace zjištěné v našem souboru pacientů zahrnovaly např. trizomii chromozomu 12, deleci 13q14 nebo 17p13.1 K vyšetření jsme použili HumanGenome CGH Microarray 44B obsahující asi 44.000 ologonukleotidů o délce 60 bazí navržených pro rovnoměrné pokrytí celého gešnomu. Průměrná vzdálenost mezi jednotlivými sondami v genomu je přibližně 35 kb. Většina sond je navržena do kódujících oblastí genomu, menší část hybridizuje s intergenovými úseky DNA. Sondy jsou syntetizovány in-situ na čipu metodou SurePrint technology, která využívá k depozici nukleotidů ink-jet metodu. Výsledky analýzy CGH čipů nejenže potvrdily cytogenetická data, ale zároveň odhalily další aberace genomu, např. delece 18q nebo delece chromozomu X u jednoho z pacientů. Dokázali jsme, že arrayCGH jsou vhodkým rozšířením současných cytogenetických postupů, především jako metoda screeningu genomových aberací s velmi dobrou dchopností jejich lokalizace. Lze očekávat, že CGH čipy najdou velmi rychle uplatnění nejen v lékařském výzkumu, ale i onkologické a prenatální diagnostice.