2009
Stanovení vybraných parametrů imunitního systému ryb
BUCHTÍKOVÁ, Soňa, Libor VOJTEK a Pavel HYRŠLZákladní údaje
Originální název
Stanovení vybraných parametrů imunitního systému ryb
Název česky
Stanovení vybraných parametrů imunitního systému ryb
Název anglicky
Assesment of selected fish immune parameters
Autoři
BUCHTÍKOVÁ, Soňa (203 Česká republika, domácí), Libor VOJTEK (203 Česká republika, domácí) a Pavel HYRŠL (203 Česká republika, garant, domácí)
Vydání
Sborník abstraktů Zoologické dny Brno 2009, 2009
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Konferenční abstrakt
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/09:00029197
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
978-80-87189-03-0
Klíčová slova anglicky
fish immune system; cell immunity; humoral immunity; oxidative burst; phagocyte; reactive oxygen metabolites; complement; lysozyme; antibodies
Štítky
Příznaky
Mezinárodní význam
Změněno: 5. 1. 2011 12:27, Mgr. Libor Vojtek, Ph.D.
V originále
Imunitní systém ryb můžeme rozdělit na složku buněčnou a humorální. Buněčná složka nespecifická je tvořena fagocyty a cytotoxickými buňkami, specifická T a B lymfocyty. Humorální imunitu nespecifickou zastupují lektiny, lytické enzymy (např. lysozym) a komplement, specifickou protilátky třídy IgM. Na našem pracovišti měříme z nespecifických složek imunity oxidativní vzplanutí fagocytů v plné krvi, aktivitu komplementového systému v plasmě a koncentraci lysozymu v kožním mukusu. Ze složek specifické imunity stanovujeme koncentraci protilátek IgM. Oxidativní vzplanutí fagocytů se provádí luminiscenční metodou. Plná heparinizovaná krev je po naředění smíchána s luminolem a aktivátorem, který se váže na receptory fagocytů a způsobuje jejich aktivaci. Nejdůležitějšími ukazateli oxidativního vzplanutí fagocytů jsou vrchol luminiscenční kinetické odpovědi, čas jeho dosažení a celkové vyprodukované množství reaktivních metabolitů kyslíku. Ke stanovení aktivity komplementu v plasmě se používá luminiscenční metoda. Využívá rekombinantní bioluminiscenční bakteriální kmen E. coli. Světelná emise vyžaduje přítomnost ATP, produkovaného pouze živými buňkami. Intenzita produkovaného světla odpovídá viabilitě bakterií. Z grafu závislosti luminiscence na čase je odečtena doba potřebná pro usmrcení 50% bakterií. Množství lysozymu lze stanovit in vitro radiální difúzí v agaróze. Na agarové plotny obsahující Micrococcus luteus se nanesou vzorky kožního mukusu nebo kalibrační roztok lysozymu. Průměry projasněných difúzních zón se přepočítají podle kalibrační křivky na mg/ml vzorku. Celkové množství protilátek IgM v rybí plasmě lze stanovit precipitací síranem zinečnatým, který specificky dehydratuje proteiny, ty se odpojí od roztoku a jsou odděleny centrifugací. Množství IgM ve vzorku (v g/l) je pak vypočítáno jako rozdíl mezi celkovým obsahem proteinů a proteinů obsažených v supernatantu po precipitaci a centrifugaci. Tato práce byla podpořena grantem GAČR 524/07/0188.
Anglicky
Fish immune system cen be divided into cellular and humoral part. Nonspecific cellular part is made by phagocytes and cytotoxic cells, specific by T and B lymphocytes. Nonspecific humoral immunity composes mainly of lectins, complement system and lytic enzymes, e.g. lysozyme, specific immunity is characterized by presence of antibody class IgM. At our department we measure oxidative burst of phagocytes in whole blood, activity of complement in plasma and lysozyme concentration in skin mucus. Oxidative burst of phagocytes is measured by luminescence method. Whole heparinized blood is dilluted and mixed with luminol and activator, which binds to phagocytes receptors and causes its activation. The most important indicators of phagocyte oxidative burst are peaks of luminescence curve, the time of its achievement and total amount of produced reactive oxygen metabolites. Complement activity is assessed by luminescent method in plasma. Uses recombinant bioluminescent bacterial strain of E. coli. The light emission requires presence of ATP produced only by living cells. Intensity of produced light correlates with bacteria viability. From kinetic curve of luminescence the time needed for 50% killing was evaluated. Lysozyme determination is possible in vitro by radial diffusion in agarose. Samples of skin mucus or calibration solution of lysozyme are applied on agarose plates containing Micrococcus luteus. Diameters of bright diffusion zones are converted according calibration curve to mg/ml of sample. Amount of antibodies IgM in fish plasma can be assessed by precipitation with zinc sulphate, which specifically dehydrates proteins, which came out from solution and can be removed by centrifugation. The amount of IgM in the sample (in g/l) is calculated as the difference between total proteins and protein content in the supernatant after precipitation and centrifugation.
Návaznosti
| GA524/07/0188, projekt VaV |
|