Quantitative proteomic analysis of lung carcinoma cell line transfected by mutant p53 gene sequences
BOUCHAL, Pavel, Roman HRSTKA, Lenka HERNYCHOVÁ, Marek LINK, Vojtěch TAMBOR, Pavlína HOLEŠÍNSKÁ a Bořivoj VOJTĚŠEK. Quantitative proteomic analysis of lung carcinoma cell line transfected by mutant p53 gene sequences. In 2009 Swiss Proteomics Society Meeting: "Proteome Dynamics: Protein Quantification in Time and Space". 2009. |
Další formáty:
BibTeX
LaTeX
RIS
|
Základní údaje | |
---|---|
Originální název | Quantitative proteomic analysis of lung carcinoma cell line transfected by mutant p53 gene sequences |
Název česky | Kvantitativní proteomová analýza buněčné linie plicního karcinomu transfekované mutantními sekvencemi proteinu p53 |
Autoři | BOUCHAL, Pavel (203 Česká republika, garant, domácí), Roman HRSTKA (203 Česká republika), Lenka HERNYCHOVÁ (203 Česká republika), Marek LINK (203 Česká republika), Vojtěch TAMBOR (203 Česká republika), Pavlína HOLEŠÍNSKÁ (203 Česká republika, domácí) a Bořivoj VOJTĚŠEK (203 Česká republika, domácí). |
Vydání | 2009 Swiss Proteomics Society Meeting: "Proteome Dynamics: Protein Quantification in Time and Space" 2009. |
Další údaje | |
---|---|
Originální jazyk | angličtina |
Typ výsledku | Konferenční abstrakt |
Obor | 10600 1.6 Biological sciences |
Stát vydavatele | Švýcarsko |
Utajení | není předmětem státního či obchodního tajemství |
WWW | URL |
Kód RIV | RIV/00216224:14310/09:00029724 |
Organizační jednotka | Přírodovědecká fakulta |
Klíčová slova anglicky | proteomics iTRAQ p53 mutants |
Příznaky | Mezinárodní význam |
Změnil | Změnil: doc. Mgr. Pavel Bouchal, Ph.D., učo 8757. Změněno: 4. 4. 2013 17:41. |
Anotace |
---|
The present study constitutes the use of a quantitative LC-MS/MS based proteomic approach for the comparative proteomic analysis of lung carcinoma cell line H1299 steady transfected by two different mutant p53 gene sequences (hot-spot mutations at codon positions 175 and 273, respectively). The proteomics analysis method involved iTRAQ 8-plex stable isotope labeling of tryptic peptides, their separation via off-line coupled two-dimensional liquid chromatography (SCX and RP-LC) followed by tandem mass spectrometry on the MALDI-TOF/TOF platform (iTRAQ-2DLC-MS/MS). The principal aims of this study were: (1) to define the protein spectrum detectable using this approach, and (2) to quantitative compare the proteomic profiles of cells, which differ only in type of p53 mutation after 17-(allylamino)-17-demethoxygeldanamycin (17-AAG) treatment. The study resulted in the reproducible identification of 411 non-redundant proteins. |
Anotace česky |
---|
V rámci této studie byla zavedena kvantitativní proteomická metoda na bázi LC-MS/MS pro komparativní protemovou analýzu buněčné linie plicního karcinomu H1299 transfekované dvěma mutantními sekvencemi proteinu p53(hot-spot mutatace v kodonech 175 a 273. Vlastní analytická metoda zahrnovala značení tryptických peptidů značkami iTRAQ 8-plex, separaci peptidů dvourozměrnou kapalinovou chromatografií (SCX and RP-LC) následovanou tandemovou hmotnostní spektrometrií na platformě MALDI-MS/MS (iTRAQ-2DLC-MS/MS). Základní cíle byly: (1) zjistit spektrum proteinů detekovatelné tímto přístupem, (2) kvantitativně srovnat proteomové profily buněk lišících se pouze danou mutací po učinku 17-(allylamino)-17-demethoxygeldanamycinu (17-AAG). Studie vedla k reprodukovatelné identifikaci 411 proteinů. Účinek 17-AAG na buňky nesoucí p53 R175H mutanta vedl k signifikantní indukci šesti heat-shock proteinů (Hsp90 alpha, Hsp71, Hsp70, Hsp60, HSPA5, 10 kDa heat shock protein) a ke snížení hladiny elongačního faktoru 2. Stejný účinek 17-AAG na buňky nesoucí mutanta p53 R273H vedl k velmi podobnému expresnímu profilu. Navíc byla zvýšena hladina Hsp71, zatímco hladiny vimentinu a histonu H2B type 1-N byly významně sníženy. Lze říci, že naše výsledky jsou v souladu s úlohou 17-AAG jako inhibitoru Hsp90. Ukázali jsme, že účinek 17-AAG je spojen s úlohou p53 v apoptóze a že dva mutanti p53 mají různý fenotypový projev na základě různé stability a konformace proteinu p53. Zde prezentovaný proteomický přístup bude dále doplněn komparativní analýzou na úrovni cDNA ke získání kompletního pohledu na studovaný biologický problém. |
Návaznosti | |
---|---|
GP203/07/P471, projekt VaV | Název: Studium molekulárních mechanismů adaptace bakterií na změny prostředí pomocí proteomických technik |
Investor: Grantová agentura ČR, Studium molekulárních mechanismů adaptace bakterií na změny prostředí pomocí proteomických technik |
VytisknoutZobrazeno: 27. 4. 2024 14:53