2012
Relative expression of gammadelta T-cell receptor gene families detected by RT–PCR and capillary electrophoresis
TESAŘOVÁ, Lenka, Irena KRONTORÁD KOUTNÁ, Magdaléna DVOŘÁKOVÁ a Martin KLABUSAYZákladní údaje
Originální název
Relative expression of gammadelta T-cell receptor gene families detected by RT–PCR and capillary electrophoresis
Název česky
relativní exprese gamadelta TCR genových rodin detekována pomocí RT-PCR a kapilární elektroforézy
Autoři
TESAŘOVÁ, Lenka (203 Česká republika, domácí), Irena KRONTORÁD KOUTNÁ (203 Česká republika, garant, domácí), Magdaléna DVOŘÁKOVÁ (203 Česká republika, domácí) a Martin KLABUSAY (203 Česká republika)
Vydání
International Journal of immunogenetics, Blackwell Publishing Ltd, 2012, 1744-3121
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Obor
10601 Cell biology
Stát vydavatele
Velká Británie a Severní Irsko
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Odkazy
Impakt faktor
Impact factor: 1.355
Kód RIV
RIV/00216224:14330/12:00059919
Organizační jednotka
Fakulta informatiky
UT WoS
000308406600002
Klíčová slova česky
Zpětná PCR; Kapilární elektroforéza; gamadelta T lymfocyty; TCR; Vgama a Vdelta genové rodiny
Klíčová slova anglicky
Reverse transcription PCR; Capillary electrophoresis; gammadelta T cell; TCR; Vgamma and Vdelta gene families
Štítky
Změněno: 2. 3. 2018 10:13, Mgr. Lenka Tesařová, Ph.D.
V originále
Gammadelta T cells are intensively studied because their function in infection, allergy, autoimmune disease, cancer and post-transplant period is not yet fully understood. PCR-based techniques were established to study the gamma variable (Vgamma) and delta variable (Vdelta) gene families. PCR product evaluation is routinely carried out by Southern blot analysis or the third complementarity-determining region (CDR3) spectratyping, but a fast and simple assessment of Vgamma and Vdelta gene family expression is missing. The aim of our study was to test capillary electrophoresis as a potential method for evaluating the composition of the gammadelta T-cell population. This report provides optimized PCR conditions for gammadelta T-cell receptor amplification. Further it describes the utilization of capillary electrophoresis in the Agilent 2100 Bioanalyzer to evaluate the relative expression of Vgamma and Vdelta gene families after their amplification. An application of the methodology to peripheral blood mononuclear cell samples from patients during hemato-oncological treatment is shown. The described methodology is fast and simple to operate and is therefore suitable as a first screening of the gammadelta T-cell population composition in tissues of interest.
Česky
Gamadelta T lymfocyty jsou předmětem intenzivního výzkumu, protože jejich funkce během infekcí, alergií, autoimunitních chorob, nádorů a po transplantacích není stále plně objasněna. Ke studiu Vgama a Vdelta genových rodin byly zavedeny techniky založené na PCR. Produkty PCR jsou běžně hodnoceny pomocí Southernova blotingu či CDR3 spektratypizace, ale rychlé a jednoduché zhodnocení exprese Vgama a Vdelta genových rodin chybí. Cílem naší studie bylo zhodnotit kapilární elektroforézu jako možný nástroj na zhodnocení populace gamadelta T lymfocytů. Tato práce poskytuje optimalizované podmínky PCR na amplifikaci gamadelta TCR. Dále popisuje využití kapilární elektroforézy na přístroji Agilent 2100 Bioanalyzer pro stanovení relativní exprese Vgama a Vdelta genových rodin po jejich amplifikaci. Tato metodika je aplikována na vzorky mononukleárních buněk periferní krve od pacientů při hemato-onkologické léčbě. Uvedená metodika je rychlá a snadná na provedení, a proto je vhodná na první vyšetření složení populace gamadelta T lymfocytů v cílové tkáni.
Návaznosti
| MSM0021622430, záměr |
| ||
| NS9681, projekt VaV |
|