Úlohou této diplomové práce je podrobné studium DNA vazebných vlastností nádorového supresoru proteinu BRCA1. Protein BRCA1 hraje důležitou roli v ochraně DNA před poškozením a účastní se reparačních mechanizmů buňky, čímž chrání organismus před vznikem nádorového bujení. U 90% případů dědičné formy nádoru prsu a vaječníku je protein BRCA1 mutován. V poslední době se ukazuje, že pro funkci proteinu BRCA1 je velmi důležitá i přímá vazba na DNA. V rámci diplomové práce bude izolován protein BRCA1, klonována a izolována cílová sekvence DNA pro vazbu proteinu BRCA1, a DNA bude studována po poškození. Pomocí gelové retardační analýzy a dalších metod budeme zkoumat vazbu proteinu BRCA1 na různé DNA, zejména na její cílové sekvence, na jednořetezcové a dvouřetezcové zlomy, na DNA poškozenou cis-Platinou (a jinými kancerostatiky) a na ne-B DNA struktury stabilizované nadšroubovicovým vinutím DNA. Seznam odborné literatury: 1 Brazda, V., Jagelska, E. B., Liao, J. C. and Arrowsmith, C. H. (2009) The Central Region of BRCA1 Binds Preferentially to Supercoiled DNA. J Biomol Struct Dyn 27, 97-104 2 Buck, M. (2008) A novel domain of BRCA1 interacts with p53 in breast cancer cells. Cancer Lett 268, 137-45 3 Deng, C. X. and Brodie, S. G. (2000) Roles of BRCA1 and its interacting proteins. Bioessays 22, 728-37 4 Fabbro, M. and Henderson, B. R. (2008) BARD1 regulates BRCA1-mediated transactivation of the p21WAF1/CIP1 and Gadd45 promoters. Cancer Lett 263, 189-96 5 Grabsch, H., Dattani, M., Barker, L., Maughan, N., Maude, K., Hansen, O., Gabbert, H. E., Quirke, P. and Mueller, W. (2006) Expression of DNA double-strand break repair proteins ATM and BRCA1 predicts survival in colorectal cancer. Clin Cancer Res 12, 1494-500 6 Liu, Z., Wu, J. and Yu, X. (2007) CCDC98 targets BRCA1 to DNA damage sites. Nat Struct Mol Biol 14, 716-20 7 Mark, W. Y., Liao, J. C., Lu, Y., Ayed, A., Laister, R., Szymczyna, B., Chakrabartty, A. and Arrowsmith, C. H. (2005) Characterization of segments from the central region of BRCA1: an intrinsically disordered scaffold for multiple protein-protein and protein-DNA interactions? J Mol Biol 345, 275-87 8 Naseem, R. and Webb, M. (2008) Analysis of the DNA binding activity of BRCA1 and its modulation by the tumour suppressor p53. PLoS ONE 3, e2336 9 Miyoshi, Y., Kurosumi, M., Kurebayashi, J., Matsuura, N., Takahashi, M., Tokunaga, E., Egawa, C., Masuda, N., Kim, S. J., Okishiro, M., Yanagisawa, T., Ueda, S., Taguchi, T., Tamaki, Y. and Noguchi, S. (2008) Topoisomerase IIalpha-positive and BRCA1-negative phenotype: association with favorable response to epirubicin-based regimens for human breast cancers. Cancer Lett 264, 44-53 10 Paull, T. T., Cortez, D., Bowers, B., Elledge, S. J. and Gellert, M. (2001) Direct DNA binding by Brca1. Proc Natl Acad Sci U S A 98, 6086-91 11 Scata, K. A. and El-Deiry, W. S. (2007) p53, BRCA1 and breast Cancer chemoresistance. Adv Exp Med Biol 608, 70-86 12 Ratanaphan, A., Wasiksiri, S., Canyuk, B. and Prasertsan, P. (2009) Cisplatin-damaged BRCA1 exhibits altered thermostability and transcriptional transactivation. Cancer Biol Ther 8