Odměrné nádobí a odměřování objemů

Odměrné nádobí, odměřování objemů

Základní operací v odměrné analýze je odměřování objemů, což je obdoba určování hmotnosti ve vážkové analýze. K odměřování objemů používáme v analytické chemii kalibrovaného nádobí. Pro přípravu roztoků o přesné koncentraci používáme odměrné baňky, pro přesné odměřováni objemů pipety a konečně pro přesné měřeni spotřeby odměrných roztoků při titraci byrety. K méně přesnému nebo přibližnému odměřování objemů slouží odměrné válce (roztoky pomocných činidel, jako jsou kyseliny či pufry k úpravě prostředí pro titraci, není nutno přesně odměřovat pipetováním!). Odměrné nádobí je kalibrováno podle způsobu měřeni buď na dolití, t.j. po doplnění odměrné nádoby (odměrná baňka) po značku je uvnitř nádoby vyznačený objem, nebo na vylití, tj. vyteklý objem odpovídá přesně vyznačenému objemu. Přitom ulpí vlivem smáčivosti na stěnách nádoby (pipety, byrety) určité množství kapaliny ve formě tenkého filmu a též ve výtokové špičce (pipety) zbude malé množství kapaliny a obě tato množství nepatří k odměřenému objemu. Kalibrace na dolití je vyznačena zkratkou "In“, kalibrace na vylití zkratkou "Ex". Spolu s tímto označením je na nádobí uvedena teplota odměřovaného roztoku, pro kterou platí tato kalibrace, u novějšího skla zpravidla 20 °C. Nádoby kalibrované na dolití nelze použít k odměření objemu vylitím (na stěnách nádoby zůstane nedefinované množství kapaliny, které sníží odměřený objem) a naopak. Pro odměrné nádobí obecně platí, že se nesmí zahřívat ani vysoušet v sušárnách! Zásadně nedržíme odměrné nádobí rukou v místech, kde se nachází odměřovaný roztok, protože se teplem ruky roztok zahřívá a mění objem. Odměrné nádobí je kalibrováno s přesností, která odpovídá výrobní normě a třídě přesnosti a zpravidla se pohybuje v řádu desetin procenta deklarovaného objemu. V praxi to znamená, že pro běžně používané pipety, byrety a odměrné baňky je deklarovaný objem odměřen s přesností několika setin mililitru (viz tabulka níže).

Odměrné baňky

Odměrné baňky slouží k přípravě roztoků určité přesné koncentrace (nejčastěji odměrných a standardních roztoků). Mají hruškovitý tvar s dlouhým úzkým hrdlem. Na hrdle je vyryta po celém obvodě jediná ryska, která vyznačuje, kam až je nutno baňku doplnit, aby obsahovala jmenovitý objem. Odměrné baňky jsou kalibrovány na dolití. Tuhé látky se zásadně nerozpouštějí přímo v baňce (nesmí se zahřívat!), nýbrž vždy předem v kádince. Přesnou navážku tuhé látky spláchneme do kádinky, přidáme rozpouštědlo (zpravidla destilovanou vodu) v množství zhruba 2/3 konečného objemu, mícháme tyčinkou a případně zahříváme. Dokonale rozpuštěnou látku převedeme kvantitativně pomocí nálevky do čisté a opláchnuté odměrné baňky, přičemž roztok přeléváme po tyčince, která se dotýká vnitřní stěny nálevky. Kádinku vypláchneme pomoci střičky třikrát (celá vnitřní stěna kádinky musí být opláchnuta), do odměrné baňky opláchneme i tyčinku a nálevku zevnitř a její stonek po povytaženi z hrdla baňky i zvnějšku. Koncentrovanější roztoky je nutno během této operace několikrát promísit krouživými pohyby baňky. Má-li obsah baňky vyšší teplotu než laboratorní, baňku ochladíme pod tekoucí vodou na okolní teplotu (baňku přitom držíme prsty za hrdlo nad ryskou). Teprve potom můžeme baňku doplnit střičkou několik milimetrů pod značku. Pro přesné doplněni po značku postavíme baňku na stůl a destilovanou vodu přidáváme po kapkách z menší pipety, až se spodní okraj menisku právě kryje s ryskou (Obr. 7). Nakonec baňku zazátkujeme a roztok dokonale promícháme několikanásobným obrácením baňky. Někdy zůstane část kapaliny u zátky, a proto již hladina kapaliny v baňce nedosahuje rysky – v tomto případě ale nikdy hladinu již po rysku dodatečně nedoplňujeme! Před odběrem roztoku po delším stání, kdy v hrdle kondenzuje voda a roztok proto mění koncentraci, je nutné provést promíchání.

Obr. 7: Správné doplnění odměrné baňky (spodní hrana menisku se kryje s ryskou)

Pipety

Skleněné pipety používáme k přesnému odměřování alikvotních podílů roztoku vzorku nebo odměrných činidel.

Jsou to skleněné trubice, většinou s válcovitě rozšířenou střední částí, opatřené buď jedinou ryskou (tzv. nedělené pipety), nebo více ryskami pro odměření jednotlivých dílčích objemů (tzv. dělené pipety). Pipety jsou kalibrovány na vylití. Nejčastěji se používají k pipetování objemů od desetin mililitru po desítky mililitrů.

Obr. 8: Příklady mikropipet a skleněných dělených a nedělených pipet

Pro pipetování skleněnou pipetou používáme buď speciální nástavec (pipetík), nebo pipetovací balónek. Pipetovací balónek má tři ventily, označené, A, S a E. A (Air) je ventil pro vypouštění a nasávání vzduchu do balónku a je tedy klíčový pro regulaci tlaku v balónku. S (Suction) je ventil pro nasávání kapaliny do pipety a ventil E (Empty) je určen pro vypuštění kapaliny z pipety.

Obr. 9: Pipetovací balónek (a), řez pipetovacím balónkem (b) a mechanický pipetovací nástavec (c)

Pipety musí být před použitím řádně vyčištěny, odmaštěny a vysušeny. Před pipetováním roztoku pipetu nejprve vypláchneme destilovanou vodou a potom také daným roztokem nejlépe tím způsobem, že jej nasajeme přibližně do poloviny jejího objemu, horní konec rychle uzavřeme ukazovákem, pipetu dáme do vodorovné polohy a otáčením kolem její osy opláchneme celý vnitřní povrch až kousek za značku. Nakonec roztok vypustíme do odpadu. Vypláchnutí pipety je nutné, obzvláště pokud není suchá, jinak si pipetovaný roztok zředíme!

Postup při pipetování balónkem:

1. Stiskněte balónek a současně stiskněte ventil A (Air). Tím vytlačíte vzduch z balónku, čímž se vytvoří podtlak potřebný pro další kroky.
2. Nasaďte balónek na horní konec pipety tak, aby byl dobře připevněn a těsně přiléhal. Nepoužívejte hrubou sílu, ať nedojde k vytlačení kuličky ventilu S do těla balónku.
3. Vložte dolní konec pipety do kapaliny, kterou chcete pipetovat. Stiskněte a držte ventil S (Suction), což způsobí nasávání kapaliny do pipety pomocí podtlaku vytvořeného v balónku. Jakmile kapalina dosáhne hladiny nad požadovanou rysku pipety, uvolněte ventil S. Dávejte pozor na to, abyste nenasáli kapalinu do balónku.
4. Mírným stisknutím ventilu E (Empty), uvolněte přebytečnou kapalinu z pipety, dokud se spodní okraj menisku přesně nekryje s ryskou.
5. Přesuňte pipetu nad nádobu, do které chcete kapalinu vypustit. Roztok z pipety vypouštějte tak, že se špička pipety dotýká vnitřní stěny nádobky a roztok nechejte volně odtékat po stěně. Pipetu držte svisle. Potom vyčkejte ještě 15 vteřin (jak předepisuje norma). Po tuto dobu se ztenčuje vrstva roztoku na stěnách pipety (pozorujeme zvyšování menisku ve špičce pipety) až na trvale ulpívající film. Pevně ulpívající film a zbytek roztoku ve špičce pipety musí být zachován, abychom přesně odpipetovali definovaný objem. Proto pipetu nikdy nevyfukujte! Pipety s poškozenou špičkou jsou znehodnocené a nelze je pro přesnou práci používat.
6. Po skončení práce se pipetu vypláchněte destilovanou vodou výše popsaným způsobem.

Postup při pipetování pomocí mechanického nástavce:

1. Vložte horní konec skleněné pipety do spodní části mechanického nástavce. Ujistěte se, že je pipeta pevně připevněna a těsní.
2. Vložte dolní konec pipety do kapaliny, kterou chcete pipetovat. Otáčejte kolečkem na mechanickém nástavci (obvykle proti směru hodinových ručiček) pro nasátí kapaliny do pipety.
3. Jakmile kapalina dosáhne hladiny nad požadovanou rysku pipety (2–3 cm), uvolněte nástavec a pipetu rychle uzavřete ukazováčkem (ne palcem!). Špičku pipety při tom opřete o dno nádobky, zpomalíte tak vytékání kapaliny z pipety. Dávejte pozor na to, abyste nenasáli kapalinu do balónku. Špičku pipety vyjměte z roztoku a opřete ji o vnitřní stěnu nádobky, ze které pipetujete. Při odměřování musí být pipeta vždy ve svislé poloze a značka ve výši oka. Jemným uvolněním prstu odpusťte přebytečný roztok, až se spodní okraj menisku přesně kryje s ryskou.
4. Přesuňte pipetu nad nádobu, do které chcete kapalinu vypustit. Roztok z pipety vypouštějte tak, že se špička pipety dotýká vnitřní stěny nádobky a roztok nechejte volně odtékat po stěně. Pipetu držte svisle. Potom vyčkejte ještě 15 vteřin (jak předepisuje norma). Po tuto dobu se ztenčuje vrstva roztoku na stěnách pipety (pozorujeme zvyšování menisku ve špičce pipety) až na trvale ulpívající film. Pevně ulpívající film a zbytek roztoku ve špičce pipety musí být zachován, abychom přesně odpipetovali definovaný objem. Proto pipetu nikdy nevyfukujte! Pipety s poškozenou špičkou jsou znehodnocené a nelze je pro přesnou práci používat.
5. Po skončení práce se pipetu vypláchněte destilovanou vodou výše popsaným způsobem.

Video: Základní informace o skleněných pipetách

Video: Proplach pipety před použitím

Video: Pipetování s použitím pipetovacího balónku

Video: Pipetování s použitím pipetovacího nástavce

Dělené pipety

mají kalibrační stupnici s počátkem buď v horní, nebo dolní poloze. Pipety s počátkem (nulou) v horní poloze jsou v současné době vyráběny téměř výhradně. V prvním případě odměříme požadovaný objem tak, že meniskus nastavíme na počátek stupnice a roztok odpouštíme, až je meniskus několik milimetrů nad zvolenou značkou, vyčkáme podle normy 7 sekund a teprve potom necháme meniskus klesnout na zvolenou rysku. V druhém případě nastavíme meniskus na zvolenou rysku a dále postupujeme jako u nedělené pipety (obsah pipety vypustíme). Čekací doba je ovšem i zde 7 sekund. Pro odměření objemu celé pipety (např. 5 ml u dělené pipety na 5 ml) je však vhodnější dát přednost pipetě nedělené.

Mikropipety

Jsou nástroje používané v laboratořích pro přesné dávkování velmi malých objemů kapalin. Slouží nejen k přímému pipetování (dávkování zředěných vodných roztoků), což je nejběžnější technika pipetování ale i k reverznímu pipetování (dávkování viskózních, smáčivých nebo vysoce těkavých kapalin), opakovanému pipetování (opakované dávkování stejného objemu) nebo k pipetování heterogenních vzorků (např. krev). Aby bylo zajištěno přesné a reprodukovatelné pipetování, je důležité dodržovat několik základních pravidel:

• Před zahájením pipetování je nutné na spodní díl pipety nasadit jednorázovou špičku. Ujistěte se, že je špička pevně a rovnoměrně nasazena, aby se zabránilo úniku kapaliny nebo vzniku vzduchových bublin, které by mohly ovlivnit přesnost měření. Nesahejte na spodní část špičky.
• Při nastavování pipetovaného objemu na mikropipetě pomocí ovladače postupujte opatrně. Jemné otáčení ovladače umožní nastavení správného objemu, který je zobrazen na ukazateli objemu, obvykle umístěném na boku pipety.
• Ovladač mikropipety má obvykle tři polohy; základní a dvě polohy stisku ovladače. První poloha stisku slouží k nasávání kapaliny do špičky, zatímco druhá poloha se používá pro úplné vypuštění kapaliny ze špičky. Druhá poloha je rovněž využívána při reverzním či opakovaném pipetování.
• Při manipulaci s ovladačem pipety je důležité postupovat pomalu a hlavně plynule, zejména při nasávání a vypouštění kapaliny. Rychlé nebo trhané pohyby mohou způsobit vznik vzduchových bublin nebo nežádoucí ztráty kapaliny, což by mohlo vést k nepřesnostem v pipetování.
• Pipetu je třeba držet ve svislé poloze při nasávání kapaliny, aby byl zajištěn správný objem. Při vypouštění kapaliny je vhodné držet pipetu pod mírným úhlem vůči stěně nádoby, aby se zajistilo, že všechen nasátý objem kapaliny bude vypuštěn.

Dodržování těchto zásad při pipetování mikropipetou je nezbytné pro dosažení spolehlivých a přesných výsledků v laboratorní práci. Následující postupy zahrnují hlavní techniky pipetování.

Video: Základní informace o mikropipetách

Video: Příprava před pipetováním

Postup při přímém pipetování:

Slouží k pipetování zředěných roztoků.

1. Nasaďte špičku na spodní díl pipety a ujistěte se, že je správně upevněna.
2. Před samotným pipetováním špičku 2–3 krát naplňte a vyprázdněte vzorkem, který budete pipetovat. Tento krok je důležitý proto, že po vyprázdnění špičky zůstává vnitřní stěna špičky pokrytá tenkým filmem kapaliny. Pokud byste tento krok vynechali, vyprázdněný objem by byl menší, než je požadovaná hodnota, a snížila by se přesnost pipetování.
3. Nastavte požadovaný objem, který budete pipetovat, opatrným otáčením ovladače (ukazatel bývá umístěn na boku pipety)
4. Při nasávání kapaliny do špičky mějte pipetu vždy svisle. Pro nasátí kapaliny stiskněte ovladač do první polohy, špičku vnořte do kapaliny a pomalu ovladač uvolněte (dojde k nasátí požadovaného objemu kapaliny do špičky). Poté pipetu se špičkou opatrně vytáhněte z kapaliny tak, že špička se dotýká nádobky, ze které pipetujete – tím odstraníte přebytečnou kapalinu z vnější strany špičky. Zkontrolujte, zda ve špičce nejsou vzduchové bubliny. Pokud ano, může být špička špatně nasazena. Vypusťte kapalinu ze špičky a postup v tomto kroku zopakujte.
5. Při vypouštění kapaliny nakloňte pipetu se špičkou pod mírným úhlem vůči stěně nádoby. Pokud již v nádobě nějaká kapalina je, špička by měla být nad hladinou této kapaliny. Plynule stiskněte ovladač do první polohy, vyčkejte přibližně jednu vteřinu, a poté rychlým stisknutím pokračujte do druhé polohy ovladače, čímž dojde k úplnému vyprázdnění špičky. Nakonec špičku vytáhněte z nádoby a uvolněte ovladač do základní polohy.

Video: Postup při přímém pipetování

Postup při reverzním pipetování:

Slouží k pipetování vysoce viskózních nebo pěnících kapalin a kapalin s vysokou těkavostí nebo i dávkování velmi malých objemů.

1. Nasaďte špičku na spodní díl pipety a ujistěte se, že je správně upevněna.
2. Před samotným pipetováním špičku 2–3 krát naplňte a vyprázdněte vzorkem, který budete pipetovat. Tento krok je důležitý proto, že po vyprázdnění špičky zůstává vnitřní stěna špičky pokrytá tenkým filmem kapaliny. Pokud byste tento krok vynechali, vyprázdněný objem by byl menší, než je požadovaná hodnota, a snížila by se přesnost pipetování.
3. Nastavte požadovaný objem, který budete pipetovat, opatrným otáčením ovladače (ukazatel bývá umístěn na boku pipety)
4. Při nasávání kapaliny do špičky mějte pipetu vždy svisle. Pro nasátí kapaliny stiskněte ovladač do druhé polohy, špičku vnořte do kapaliny a pomalu ovladač uvolněte (dojde k nasátí kapaliny do celého objemu špičky). Poté pipetu se špičkou opatrně vytáhněte z kapaliny tak, že špička se dotýká nádobky, ze které pipetujete – tím odstraníte přebytečnou kapalinu z vnější strany špičky. Zkontrolujte, zda ve špičce nejsou vzduchové bubliny. Pokud ano, může být špička špatně nasazena. Vypusťte kapalinu ze špičky a postup v tomto kroku zopakujte.
5. Při vypouštění kapaliny nakloňte pipetu se špičkou pod mírným úhlem vůči stěně nádoby. Pokud již v nádobě nějaká kapalina je, špička by měla být nad hladinou této kapaliny. Plynule stiskněte ovladač do první polohy ovladače, čímž dojde k nadávkování požadovaného (nastaveného) objemu kapaliny. Špičku vytáhněte z nádoby a uvolněte ovladač do základní polohy. Ve špičce zůstane kapalina, kterou můžete využít k opakovanému pipetování do jiných nádobek, nebo stiskem ovladače do druhé polohy můžete všechnu tuto kapalinu ze špičky vypustit. 

Video: Postup při reverzním pipetování

Postup při opakovaném pipetování:

Slouží k pipetování stejného objemu stejné kapaliny (rychlejší způsob).

1. Nasaďte špičku na spodní díl pipety a ujistěte se, že je správně upevněna.
2. Před samotným pipetováním špičku 2–3 krát naplňte a vyprázdněte vzorkem, který budete pipetovat. Tento krok je důležitý proto, že po vyprázdnění špičky zůstává vnitřní stěna špičky pokrytá tenkým filmem kapaliny. Pokud byste tento krok vynechali, vyprázdněný objem by byl menší, než je požadovaná hodnota, a snížila by se přesnost pipetování.
3. Nastavte požadovaný objem, který budete pipetovat, opatrným otáčením ovladače (ukazatel bývá umístěn na boku pipety)
4. Při nasávání kapaliny do špičky mějte pipetu vždy svisle. Pro nasátí kapaliny stiskněte ovladač do druhé polohy, špičku vnořte do kapaliny a pomalu ovladač uvolněte (dojde k nasátí kapaliny do celého objemu špičky). Poté pipetu se špičkou opatrně vytáhněte z kapaliny tak, že špička se dotýká nádobky, ze které pipetujete – tím odstraníte přebytečnou kapalinu z vnější strany špičky. Zkontrolujte, zda ve špičce nejsou vzduchové bubliny. Pokud ano, může být špička špatně nasazena. Vypusťte kapalinu ze špičky a postup v tomto kroku zopakujte.
5. Při vypouštění kapaliny nakloňte pipetu se špičkou pod mírným úhlem vůči stěně nádoby. Pokud již v nádobě nějaká kapalina je, špička by měla být nad hladinou této kapaliny. Plynule stiskněte ovladač do první polohy, čímž dojde k nadávkování požadovaného (nastaveného) objemu kapaliny. Špičku vytáhněte z nádoby a uvolněte ovladač do základní polohy. Špičku umístěte do další nádoby a stisknutím ovladače do první polohy nadávkujte požadovaný objem. Tento postup opakujte tak dlouho, dle požadovaného množství opakování.

Postup při pipetování heterogenních vzorků:

Slouží k pipetování vzorků, u kterých není možné provést proplach špičky pipety vzorkem (bod 3 předchozích technik). Jedná se například o vzorky krve.

1. Nasaďte špičku na spodní díl pipety a ujistěte se, že je správně upevněna.
2. Nastavte požadovaný objem, který budete pipetovat, opatrným otáčením ovladače (ukazatel bývá umístěn na boku pipety)
3. Při nasávání kapaliny do špičky mějte pipetu vždy svisle. Pro nasátí kapaliny stiskněte ovladač do první polohy, špičku vnořte do kapaliny a pomalu ovladač uvolněte (dojde k nasátí požadovaného objemu kapaliny do špičky). Poté pipetu se špičkou opatrně vytáhněte z kapaliny tak, že špička se dotýká nádobky, ze které pipetujete – tím odstraníte přebytečnou kapalinu z vnější strany špičky. Zkontrolujte, zda ve špičce nejsou vzduchové bubliny. Pokud ano, může být špička špatně nasazena. Vypusťte kapalinu ze špičky a postup v tomto kroku zopakujte. Otřete špičku suchou buničinou.
4. Při vypouštění kapaliny nakloňte pipetu se špičkou pod mírným úhlem vůči stěně nádoby a špičku ponořte do kapaliny, která je už v nádobce. Plynule stiskněte ovladač do první polohy, vyčkejte přibližně jednu vteřinu pro vyprázdnění špičky. Ujistěte se, že špička je pod hladinou a ovladač uvolněte do výchozí polohy, ať dojde ke zpětnému nasátí kapaliny do špičky. Opět ovladač stiskněte do první polohy. Tento postup opakujte, dokud nezůstane špička čistá. Nakonec stiskněte ovladač do druhé polohy k úplnému vypuštění a špičku vytáhněte z kapaliny. Ovladač uvolněte do základní polohy.

Video: Postup při pipetování heterogenních vzorků

Byrety

Jsou to skleněné trubice o stejnoměrném průměru, opatřené stupnicí a v dolní části výpustním kohoutem buď zábrusovým, teflonovým nebo kuličkovým ventilem. Byreta s kuličkovým ventilem je určena pro práci s alkalickými roztoky, které by mohly způsobit „zapečení“ skleněného zábrusového kohoutu (trvalé slepení zabroušených ploch skleněného kohoutu vodním sklem, které vznikne působením alkálií na porušený povrch skla). Kuličkový ventil se otvírá stiskem hadičky v místě kuličky, čímž se vytvoří mezi kuličkou a pryžovou hadičkou kanálky, kterými může roztok z byrety vytékat. Byrety s teflonovým ventilem je možné používat jak pro kyselé, tak alkalické roztoky.  Byrety jsou kalibrovány na vylití. Nejčastěji používáme byrety na 50 ml s dělením na 0,1 ml. Při odečítání objemu se snažíme odhadovat druhé desetinné místo (setiny mililitru) z polohy menisku mezi dvěma sousedními ryskami. Na byretě odečtený objem uvádíme zásadně na dvě desetinná místa. U byret na 10 ml odečítáme objem na 0,01 ml.

Obr. 10: Příklady byret (upraveno dle https://www.canfortlab.com) 

Postup při titrování vzorků:

1. Byretu vypláchněte odměrným roztokem (byrety se totiž uchovávají naplněné destilovanou vodou). Byretu naplňte asi do poloviny odměrným roztokem a podobně jako u pipety pipeta otáčivým pohybem ve vodorovné poloze byrety opláchněte celou vnitřní stěnu, poté roztok vypusťte z byrety přes kohout, aby se i ten propláchl.
2. Takto připravenou byretu upevněte do stojanu tak, aby špička byrety zasahovala asi 1 cm do hrdla titrační baňky.
3. Byretu naplňte odměrným roztokem (z kádinky) pomocí malé nálevky. Dávejte pozor, aby v byretě (obzvláště mezi kohoutem a špičkou) nezůstaly uzavřeny vzduchové bubliny. Byretu naplňte několik milimetrů nad počátek stupnice a odstraňte nálevku!
4. Otočením kohoutu byrety vypusťte přebytečný odměrný roztok (do odpadní kádinky) a meniskus nastavte na počátek stupnice. Takto odpuštěný odměrný roztok již nepoužívejte a nevracejte do zásobní láhve. Otřete kapku na špičce byrety o vnitřní stěnu odpadní kádinky. V tuto chvíli máte byretu připravenou k titrování. Titraci provádějte tak, že titrační baňku (obsahuje vzorek, indikátor a případně další látky dle pracovního návodu) držíte za hrdlo v šikovnější ruce a krouživým pohybem mícháte obsah titrační baňky, zatímco druhou rukou ovládáte kohout byrety.
5. Odměrný roztok můžete ze začátku z byrety přidávat rychleji (místě přítoku odměrného roztoku se titrovaný roztok barví na konečné zbarvení, dochází k lokálnímu přetitrování, mícháním se však toto zbarvení ztrácí). Blížící se bod ekvivalence se projevuje tak, odbarvení se děje pomaleji. V tuto chvíli již přidávejte odměrný roztok po kapkách (pořád přitom mícháte obsah v titrační baňce). Pokračujte tímto způsobem, dokud není zbarvení titrovaného roztoku trvalé (alespoň 30 vteřin). Ze stupnice byrety odečtěte spotřebu na dvě desetinná místa.
6. Každou titraci zopakujte alespoň třikrát. Spotřeby by se neměly lišit o více než 0,10 ml.
7. První, časově náročnou titraci můžete nahradit titrací orientační, kdy odměrný roztok přidáváte z byrety rychle po celou dobu titrace až do konečné změny zbarvení. Tímto způsobem získáme přibližný objem pro dosažení bodu ekvivalence. Při dalších třech titracích pak můžete přidat až 90 % z tohoto rychle a zbytek dotitrovat po kapkách.
8. Po skončení titrací vylejte odměrný roztok z byrety (nevracejte jej do zásobní láhve), byretu vypláchněte destilovanou vodou a poté naplňte destilovanou vodou až nad začátek stupnice byrety.

Video: Příprava byrety na titraci

Video: Správný způsob titrování

Způsob odečítání objemu

Kapaliny, smáčející povrch skla (např. vodné roztoky), vytvářejí meniskus, jehož spodní okraj se při odměřování objemů musí krýt s kalibrační ryskou odměrného nádobí (u neprůhledných roztoků je nutno použít horní okraj menisku, pipety a odměrné baňky je však nutno na tento způsob čtení překalibrovat). Při pozorování menisku je nutno snížit chybu, způsobenou paralaxou, na minimum (paralaxa obecně vzniká při odečítání výchylky analogového měřicího přístroje, není-li rovina pohybu ukazatele přístroje shodná s rovinou stupnice a odečítáme-li výchylku ukazatele pod různým úhlem). Spojnice oka a rysky na odměrném nádobí musí svírat s podélnou osou pipety, byrety nebo hrdla odměrné baňky vždy úhel 90°. Podélná osa proto musí být při odečítání ve svislé poloze a směr pozorování vodorovný. Při správném odečítání se celoobvodová ryska musí jevit jako úsečka. Spodní okraj menisku vidíme zřetelněji, podržíme-li za ním list bílého papíru šikmo asi pod úhlem 45°. Některé byrety nebo dělené pipety jsou při výrobě opatřeny Schellbachovým pruhem (natavený pruh bílého mléčného skla s úzkým, většinou modrým proužkem). V místě menisku se modrý proužek jeví vlivem lomu světla jako shora i zdola ostře zahrocený. V doteku obou hrotů se odečítá objem na stupnici. Schellbachův pruh ale neodstraňuje vliv paralaxy při odečítání, pouze dovoluje přesnější určení polohy menisku!

Obr. 11: Odečet objemu u byrety se Schellbachovým pruhem (převzato z http://www.titrations.info)