A) Vážkové ověření preciznosti a pravdivosti pipetování

Vaším úkolem bude ověřit, jak dobře ovládáte práci s nedělenou skleněnou pipetou a mikropipetou s nastavitelným objemem a zda tyto pipety dávkují nastavené objemy. K tomuto účelu budete mít dispozici nedělenou pipetu o objemu 10 ml, mikropipetu s objemem nastavitelným v rozmezí 2–10 ml, plastové nádobky a analytické váhy, na kterých budete zjišťovat hmotnost pipetovaných objemů. Pravdivost dávkovaného objemu bude ověřováno vážkově, kdy každý přídavek objemu bude zvážen a pomocí hustoty vody bude tato hmotnost přepočítána na objem. Vypočtený objem bude poté porovnán s objemem, který pipeta měla dávkovat. Preciznost pipetování bude vyhodnocena na základě opakovaného dávkování objemu pipetou a bude vyjádřena jako odhad směrodatné odchylky.

Postup

Nejdříve zvažte na analytických vahách čtyři suché plastové nádobky o objemu 50 ml. Do dvou z nich poté budete pipetovat 10 ml destilované vody pomocí nedělené skleněné pipety. Každý tento přídavek zvážíte. Do obou nádobek nadávkujete 3 krát po 10 ml destilované vody. To samé zopakujte s mikropipetou, u které nastavíte pipetovaný objem na 10 ml a také s byretou pro objem 10 ml. Aby bylo možné přepočítat hmotnost na objem, je nutné znát hustotu vody. Vzhledem k tomu, že hustota je závislá na teplotě, změříte teplotu vody a hustotu vody odečtěte z přiložené tabulky (Tab. 7). V případě, že teplota vody neodpovídá teplotám uvedeným v tabulce, určete hustotu vody při této teplotě interpolací.

Tab. 7: Tabulka hodnot hustoty vody při různých teplotách

Do protokolu zpracujte vaše data ve formě přehledné tabulky s uvedením všech získaných experimentálních dat (hmotností, teploty vody atd.), proveďte test odlehlosti výsledků a srovnejte Vámi zjištěné objemy pipet s deklarovanými objemy (test pravdivosti výsledků) a preciznostmi. Okomentujte, která pipeta poskytuje preciznější a pravdivější výsledky.

Tab. 8: Dovolené odchylky dávkovaných objemů pipetami

B) Fotometrické a kolorimetrické ověření preciznosti pipetování

Vaším úkolem bude ověřit preciznost Vašeho pipetování fotometrickým stanovením. Pro tyto účely budete mít k dispozici mikropipety a spektrofotometr. Preciznost pipetování bude hodnocena na základě změření kalibračních roztoků o různé koncentraci Mn a vzorku o neznámé koncentraci Mn.

Postup

Ze zásobního roztoku KMnO₄ připravte kalibrační roztoky následujícím způsobem. Do čtyř 50ml odměrných baněk napipetujte 0 – 100 – 200 – 500 μl zásobního roztoku KMnO₄ o koncentraci XXX g/l. Odměrné baňky doplňte destilovanou vodou po rysku. Obsah v odměrných baňkách dobře promíchejte a změřte.

Absorbanční měření

Kalibračním roztokem s nejvyšší koncentrací Mn vypláchněte několikrát skleněnou kyvetu a naplňte ji asi do 2/3 objemu. Kyvetu držte vždy za ty stěny, přes které při měření neprochází paprsek světla (zpravidla matované) a po nalití roztoku kyvetu otřete kouskem buničité vaty. Druhou kyvetu stejným způsobem naplňte slepým pokusem (kalibrační roztok o nulové koncentraci Mn). Podle návodu u spektrofotometru nastavíte vlnovou délku 450 nm, dále nulovou polohu přístroje a po zařazení kyvety s barevným roztokem odečtěte absorbanci. Poté změňte vlnovou délku o 10 nm a nastavení nulové polohy a odečet absorbance barevného roztoku opakujte až k vlnové délce 630 nm. Ze získaných párů hodnot (vlnová délka – absorbance) sestrojte absorpční křivku a odečtěte vlnovou délku maxima absorbance. Při této vlnové délce proveďte všechna další měření. Absorpční křivku přiložte k protokolu.

Po zjištění vlnové délky maxima absorpce nastavte na spektrofotometru tuto vlnovou délku. Nastavte nulovou polohu (pomocí kyvety s deionizovanou vodou), poté do měřícího prostoru vkládejte kyvety s jednotlivými kalibračními roztoky a proměřte jejich absorbanci. Postupujte vždy od nejnižší po nejvyšší koncentraci. Proměřte absorbanci neznámého vzorku.

Sestrojte graf závislosti absorbance kalibračních roztoků na koncentraci Mn (v mg/l) a body proložte přímkou.  

Z kalibrační závislosti vypočítejte koncentraci Mn v neznámém vzorku.

Kalibrační graf přiložte k protokolu.