PřF:Bi7312 Prakt. z mol. biol. eukaryot - Informace o předmětu

Bi7312 Praktikum z molekulární biologie eukaryot

Rozsah

0/2/0. 2 kr. Ukončení: z.
Vyučováno kontaktně

Vyučující

doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Lucia Knopfová, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Jarmila Navrátilová, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Jiří Kohoutek, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Andrea Rousová (pomocník)
Mgr. Jana Pokludová (pomocník)
Mgr. Matěj Přikryl (pomocník)

Garance

doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: doc. Mgr. Petr Beneš, Ph.D.
Dodavatelské pracoviště: Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta

Rozvrh seminárních/paralelních skupin

Bi7312/01: Rozvrh nebyl do ISu vložen. L. Knopfová
Bi7312/02: Rozvrh nebyl do ISu vložen. J. Navrátilová, M. Přikryl
Bi7312/03: Rozvrh nebyl do ISu vložen. J. Pokludová, A. Rousová
Bi7312/04: Rozvrh nebyl do ISu vložen. L. Knopfová
Bi7312/05: Rozvrh nebyl do ISu vložen. J. Kohoutek
Bi7312/06: Rozvrh nebyl do ISu vložen. P. Beneš

Předpoklady

NOW( Bi7090 Molekulární biologie eukaryot )
Kurz vyžaduje znalost základních praktických návyků z oblasti mikrobiologie, biochemie a molekulární biologie, jako např. přípravu roztoků a kultivačních půd, sterilní manipulace s tekutinami, práce s automatickými pipetami, centrifugace, atd.

Omezení zápisu do předmětu

Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.

Předmět si smí zapsat nejvýše 30 stud.
Momentální stav registrace a zápisu: zapsáno: 29/30, pouze zareg.: 0/30

Mateřské obory/plány

• Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví - Lékařská genetika a molekulární diagnostika (program PřF, N-LGM)
• Biologie člověka (program PřF, N-BCL)
• Lékařská genetika a molekulární diagnostika pro odborné pracovníky v laboratorních metodách (program PřF, N-BI)
• Molekulární biologie a genetika (program PřF, N-EXB)
• Molekulární biologie a genetika (program PřF, N-MBG)

Cíle předmětu

Cílem předmětu je seznámit studenty formou praktických cvičení se základními metodami analýzy buněčného růstu, diferenciace, migrace a buněčné smrti na modelových nádorových liniích.

Výstupy z učení

Po absolvování tohoto kurzu získají studenti praktické zkušenosti jak provádět základní manipulace s živočišnými a lidskými buňkami in vitro. Budou tak schopní nejen provádět pasážování adherentních a suspenzních buněčných liniía, ale také je geneticky upravovat, analyzovat jejich morfologii, diferenciaci, proliferaci, migraci a apoptózu.

Osnova

• 1. Pasážováni savčích buněčných linií, 2D a 3D kultivace. 2. Přechodná transfekce savčích buněk plazmidem cmvGFP elektroporací a analýza účinnosti transfekce fluorescenční mikroskopií a průtokovou cytometrií. 3. Analýza aktivity transkripčních faktorů (přechodná transfekce, test na aktivitu luciferázy a beta-galaktosidázy) 4. Studium buněčné morfologie, exprese proteinů a jejich lokalizace v buňce během diferenciace savčích buněk (cytocentrifugace, fixace a barvení buněk, světelná a fluorescenční mikroskopie, frakcionace buněk, elektroforéza proteinů a imunobloting, imunocytofluorescence, fagocytóza). 5. Analýza buněčných markerů apoptózy (značení mrtvých buněk eosinem, analýza jaderné morfologie, štěpení proteinu PARP a aktivace kaspázy 3, externalizace fosfatidylserinu, stanovení mitochondriálního potenciálu, měření reaktivních kyslíkových radikálů pomocí průtokové cytometrie). 6. Určení buněčné proliferace, migrace a senescence (počítání buněk, značení buněk krystalovou violetí, analýza buněčného cyklu, analýza proliferace a migrace v reálném čase, detekce SA-beta-gal). 7. Stanovení viability 3D modelů (sféroidů) barvením calcein-AM/propidium jodid s hodnocením konfokální mikroskopií, testem MTT a ATP. Imunohistochemie.

Literatura

• GREEN, Michael R. a Joseph SAMBROOK. Molecular cloning : a laboratory manual. 4th ed. New York [N.Y.]: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012, xxxiii, s. ISBN 9781936113422. info
• FRESHNEY, R. Ian. Culture of animal cells : a manual of basic technique. 5th ed. Hoboken, N.J.: Wiley-Liss, 2005, xxvi, 642. ISBN 0471453293. info
• Apoptosis methods and protocols. Edited by Hugh J. M. Brady. Totowa, N.J.: Humana Press, 2004, xi, 304. ISBN 0896038734. info

Výukové metody

krátká teoretická příprava následovaná laboratorním cvičením a zakončená skupinovým projektem

Metody hodnocení

zápočet se udílí za aktivní přístup, účast ve výuce a zpracování závěrečné skupinové úlohy.

Další komentáře

Studijní materiály
Předmět je dovoleno ukončit i mimo zkouškové období.
Předmět je vyučován každoročně.

• Statistika zápisu (nejnovější)
  
• Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/podzim2024/Bi7312