Immobilized β-secretase on magnetic microparticles, a promising alternative for kinetic and inhibition assays

SCHEJBAL, Jan, Šárka ŠEFRANÁ a Zdeněk GLATZ. Immobilized β-secretase on magnetic microparticles, a promising alternative for kinetic and inhibition assays. In Advances in Chromatography and Electrophoresis & Chiranal 2016. 2016.

Základní údaje

• Originální název: Immobilized β-secretase on magnetic microparticles, a promising alternative for kinetic and inhibition assays
• Název česky: β-sekretasa imobilizovaná na magnetické mikročástice, slibná alternativa pro kinetické a inhibiční studie
• Autoři: SCHEJBAL, Jan, Šárka ŠEFRANÁ a Zdeněk GLATZ.
• Vydání: Advances in Chromatography and Electrophoresis & Chiranal 2016, 2016.

Další údaje

• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Klíčová slova česky: Alzheimerova choroba, beta-sekretasa, imobilizace
• Klíčová slova anglicky: Alzheimer disease, beta-secretase, immobilization
• Příznaky: Mezinárodní význam

Anotace

Immobilization of enzymes on solid supports is a well-established strategy providing numerous benefits. In our work we used magnetic microparticles to immobilize clinically important protease, the β secretase (BACE), which plays key role in the Alzheimer’s disease (AD) pathogenesis. Since curing AD is considered one of the biggest challenge modern society must face, great afford is being put into search for suitable inhibitors both in academia and pharmaceutical industry, concurrently rising demand for high-throughput, sensitive and cost effective methods. Nowadays Förster resonance energy transfer based assays are used almost exclusively to study BACE kinetics and inhibition. These assays offer very high throughput and sensitivity, but suffer from numerous inherited drawbacks. Capillary electrophoresis coupled to mass spectrometry (CE-MS) is an excellent alternative combing great features of both mass spectrometry, enabling use of unlabelled substrates with high sensitivity, and capillary electrophoresis, which requires miniscule sample volumes and short analysis time. Therefore CE-MS was used in our study to determine BACE activity.

Anotace česky

Imobilizace enzymů na pevné nosiče je zavedenou strategií poskytující řadu výhod. V naší práci jsme použili magnetické mikročástice pro imobilizaci klinicky významné proteasy, β sekretasy (BACE), která hraje klíčovou roli při vzniku a rozvoji Alzheimerovy Choroby (AD). Léčba ALzheimerovy choroby je dnes považována za jednu ze zásadních výzev, které musí moderní společnost čelit, proto akademická obec i farmaceutické firmy vyvíjí obrovské úsilí ve snaze nalézt vhodné inhibitory BACE, což současně vytváří poptávku po citlivých a levných metodách s vysokou vzorkovací kapacitou. V současnosti jsou pro studium kinetiky a inhibice BACE používány v podstatě výlučně metody založené na technikách využívajících Försterova resonančního přenosu energie. Tyto metody poskytují vysokou citlivost i vzorkovací kapacitu avšak trpí řadou podstatných nedostatků. Kapilární elektroforéza v kombinaci s hmotnostně spektrometrickou detekcí (CE-MS) je excelentní alternativou díky kombinaci skvělých vlastností jak hmotnostní spektrometrie, která umožňuje použití neznačených substrátu při zachování vysoké citlivosti, tak kapilární elektroforézy, který vyžaduje miniaturní objemy vzorků a krátký čas analýzy. Proto byla v naší práci použita CE-MS pro stanovení aktivity BACE.

Návaznosti

• GA16-06106S, projekt VaV: Název: Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu (Akronym: Alzheimer)

Investor: Grantová agentura ČR, Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu

• MUNI/A/1265/2015, interní kód MU: Název: Podpora biochemického výzkumu v roce 2016

Investor: Masarykova univerzita, Podpora biochemického výzkumu v roce 2016, DO R. 2020_Kategorie A - Specifický výzkum - Studentské výzkumné projekty