Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques

SCHEJBAL, Jan, Aleš MÁDR, Roman ŘEMÍNEK a Zdeněk GLATZ. Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques. In 31st International Symposium on Chromatography (ISC 2016). 2016.

Základní údaje

Originální název

Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques

Název česky

Nové metody studia kinetiky a inhibice β-secretasy pomocí neznačených substrátů s využitím kapilární elektroforézy v kombinaci s několika detekčními technikami

Autoři

SCHEJBAL, Jan, Aleš MÁDR, Roman ŘEMÍNEK a Zdeněk GLATZ

Vydání

31st International Symposium on Chromatography (ISC 2016), 2016

---

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Konferenční abstrakt

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

Klíčová slova česky

Alzheimerova choroba, β-sekretasa, kinetika, inhibice, kapilární elektroforéza

Klíčová slova anglicky

Alzheimer's disease, β-secretase, kinetics, inhibition, capillary electrophoresis

Příznaky

Mezinárodní význam

---

Anotace

V originále

In our work we present novel method for β-secretase kinetic and inhibition assays using unlabelled decapeptide, which contains so called Swedish mutation of amyloid precursor protein, as substrate using capillary electrophoresis coupled with mass spectrometry. Thanks to low sample consumption and high sensitivity the enzyme reaction can be carried out in as small volume as only 100 µl in just 30 min. These features together with deploying unlabelled substrate ensure low cost per analysis. What is more, our results show high difference between kinetic parameters of unlabelled substrate in comparison with kinetic parameters of fluorescently labelled substrates published in literature by two orders of magnitude even though the incubation conditions used were comparable. On the other hand determined inhibition parameters of two reported inhibitors show excellent agreement with literature data. These results were confirmed by comprehensive kinetic study of BACE1 carried out using different detection techniques.

Česky

V naší práci představujeme novou metodu studia kinetiky a inhibice β-secretasy s použitím neznačeného dekapeptidu, který obsahuje tak zvanou švédskou mutaci amyloidového prekurzorového proteinu, jako substrátu s využitím kapilární elektroforézy s hmotnostně-spektrometrickou detekcí. Díky nízké spotřebě vzorku a vysoké citlivosti může být enzymatická reakce prováděna v objemu pouhých 100 µl po dobu 30 minut. Tato vlastnost spolu s použitím neznačeného substrátu zajišťuje nízkou cenu analýzy. Navíc naše výsledky vykazují rozdíl až o dva řády v porovnání s kinetickými parametry získanými pomocí fluorescenčně značených substrátů a publikovanými v literatuře, a to i přesto že inkubační podmínky jsou srovnatelné. Na druhou stranu získané inhibiční parametry dvou inhibitorů vykazují výbornou shodu s daty nalezenými v literatuře. Tyto výsledky byly potvrzeny komplexní kinetickou studií β-secretasy s využitím různých detekčních technik.

---

Návaznosti

GA16-06106S, projekt VaV	Název: Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu (Akronym: Alzheimer) Investor: Grantová agentura ČR, Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu
MUNI/A/1265/2015, interní kód MU	Název: Podpora biochemického výzkumu v roce 2016 Investor: Masarykova univerzita, Podpora biochemického výzkumu v roce 2016, DO R. 2020_Kategorie A - Specifický výzkum - Studentské výzkumné projekty