Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques

SCHEJBAL, Jan, Aleš MÁDR, Roman ŘEMÍNEK a Zdeněk GLATZ. Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques. In 31st International Symposium on Chromatography (ISC 2016). 2016.

Základní údaje

• Originální název: Novel methods for β-secretase kinetic and inhibition assays with unlabelled substrates using capillary electrophoresis with various detection techniques
• Název česky: Nové metody studia kinetiky a inhibice β-secretasy pomocí neznačených substrátů s využitím kapilární elektroforézy v kombinaci s několika detekčními technikami
• Autoři: SCHEJBAL, Jan, Aleš MÁDR, Roman ŘEMÍNEK a Zdeněk GLATZ.
• Vydání: 31st International Symposium on Chromatography (ISC 2016), 2016.

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• Klíčová slova česky: Alzheimerova choroba, β-sekretasa, kinetika, inhibice, kapilární elektroforéza
• Klíčová slova anglicky: Alzheimer's disease, β-secretase, kinetics, inhibition, capillary electrophoresis
• Příznaky: Mezinárodní význam

Anotace

In our work we present novel method for β-secretase kinetic and inhibition assays using unlabelled decapeptide, which contains so called Swedish mutation of amyloid precursor protein, as substrate using capillary electrophoresis coupled with mass spectrometry. Thanks to low sample consumption and high sensitivity the enzyme reaction can be carried out in as small volume as only 100 µl in just 30 min. These features together with deploying unlabelled substrate ensure low cost per analysis. What is more, our results show high difference between kinetic parameters of unlabelled substrate in comparison with kinetic parameters of fluorescently labelled substrates published in literature by two orders of magnitude even though the incubation conditions used were comparable. On the other hand determined inhibition parameters of two reported inhibitors show excellent agreement with literature data. These results were confirmed by comprehensive kinetic study of BACE1 carried out using different detection techniques.

Anotace česky

V naší práci představujeme novou metodu studia kinetiky a inhibice β-secretasy s použitím neznačeného dekapeptidu, který obsahuje tak zvanou švédskou mutaci amyloidového prekurzorového proteinu, jako substrátu s využitím kapilární elektroforézy s hmotnostně-spektrometrickou detekcí. Díky nízké spotřebě vzorku a vysoké citlivosti může být enzymatická reakce prováděna v objemu pouhých 100 µl po dobu 30 minut. Tato vlastnost spolu s použitím neznačeného substrátu zajišťuje nízkou cenu analýzy. Navíc naše výsledky vykazují rozdíl až o dva řády v porovnání s kinetickými parametry získanými pomocí fluorescenčně značených substrátů a publikovanými v literatuře, a to i přesto že inkubační podmínky jsou srovnatelné. Na druhou stranu získané inhibiční parametry dvou inhibitorů vykazují výbornou shodu s daty nalezenými v literatuře. Tyto výsledky byly potvrzeny komplexní kinetickou studií β-secretasy s využitím různých detekčních technik.

Návaznosti

• GA16-06106S, projekt VaV: Název: Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu (Akronym: Alzheimer)

Investor: Grantová agentura ČR, Vysoce efektivní systém založený na kapilární elektroforéze pro screening inhibitorů beta-sekretázy jako terapeutického cíle pro Alzheimerovu chorobu

• MUNI/A/1265/2015, interní kód MU: Název: Podpora biochemického výzkumu v roce 2016

Investor: Masarykova univerzita, Podpora biochemického výzkumu v roce 2016, DO R. 2020_Kategorie A - Specifický výzkum - Studentské výzkumné projekty