Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů

MACHÁČOVÁ, Eliška, Matěj PASTUCHA, Dorota SKLENÁROVÁ, Petr SKLÁDAL a Zdeněk FARKA. Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů. 2021.

Základní údaje

• Originální název: Imunostanovení ULISA pro detekci včelích patogenů
• Název anglicky: Immunoassay ULISA for the detection of honeybee pathogens
• Autoři: MACHÁČOVÁ, Eliška (203 Česká republika, domácí), Matěj PASTUCHA (203 Česká republika, domácí), Dorota SKLENÁROVÁ (703 Slovensko, domácí), Petr SKLÁDAL (203 Česká republika, domácí) a Zdeněk FARKA (203 Česká republika, garant, domácí).
• Vydání: 2021.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Technicky realizované výsledky (prototyp, funkční vzorek)
• Obor: 10406 Analytical chemistry
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14740/21:00123368
• Organizační jednotka: Středoevropský technologický institut
• Klíčová slova anglicky: immunoassay; photon-upconversion nanoparticle; ULISA; american foulbrood; Peanibacillus larvae
• Technické parametry: Imunochemické stanovení s využitím foton-upkonverzních nanočástic jako značky pro detekci bakterie Paenibacillus larvae prováděné v 96jamkových mikrotitračních destičkách. Poskytuje limit detekce 2.9×10^3 CFU/mL.
• Štítky: rivok

Anotace

Byla vyvinuta a optimalizována metoda pro laboratorní diagnostiku nákazy včel morem včelího plodu. Analýza je založená na detekci bakterie Peanibacillus larvae, připravená anti-P. larvae protilátka je využita pro specifické zachycení bakterie v imunostanovení využívajícím foton-upkonverzní nanočástice (UCNPs) jako značku. S využitím linkeru na bázi polyethylenglykolu byly UCNPs konjugovány s protilátkou nebo streptavidinem, tento detekční prvek byl poté použit jako alternativa ke klasickému značení v enzymovém imunostanovení ELISA (enzyme-linked imunosorbent assay). Metoda ULISA (upconversion-linked immunosorbent assay) založená na UCNPs poskytuje limit detekce 2,9×10^3 CFU/ml, což představuje 22násobné zlepšení oproti ELISA stanovení. Analýza byla úspěšně aplikována také na reálných vzorcích včel, larev a měli. Dosažené výsledky ukazují vhodnost metody pro laboratorní diagnostiku nákazy včelstev morem včelího plodu.

Anotace anglicky

Method for the laboratory diagnosis of American foulbrood was developed and optimized. The analysis is based on the detection of the bacterium Paenibacillus larvae, the prepared anti-P. larvae antibody is used for the specific capture of the bacterium in an immunoassay using photon-upconversion nanoparticles (UCNPs) as a label. The UCNPs were conjugated with antibody or streptavidin using a linker based on polyethyleneglycol; this detection element was used as an alternative to conventional labeling in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The upconversion-linked immunosorbent assay (ULISA) based on UCNPs provides a detection limit of 2.9×10^3 CFU/mL, representing a 22-fold improvement compared to ELISA. The assay was successfully applied to analyze real samples of bees, larvae, and bottom hive debris. The achieved results demonstrate the suitability of the method for laboratory diagnosis of American foulbrood.

Návaznosti

• LTAB19011, projekt VaV: Název: Luminiscenční imunostanovení jako citlivý nástroj pro diagnostiku nemocí včel

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Luminiscenční imunostanovení jako citlivý nástroj pro diagnostiku nemocí včel, INTER-ACTION

• MUNI/A/1604/2020, interní kód MU: Název: Podpora biochemického výzkumu v roce 2021

Investor: Masarykova univerzita, Podpora biochemického výzkumu v roce 2021