2024
Dopad varianty S1021Qfs*98-hERG na funkci proteinu Kv11.1
JANKOVÁ, Natálie; Martin KRÁL; Olga ŠVECOVÁ; Jiří PACHERNÍK; Tomáš NOVOTNÝ et al.Základní údaje
Originální název
Dopad varianty S1021Qfs*98-hERG na funkci proteinu Kv11.1
Název anglicky
Impact of S1021Qfs*98-hERG variant on the function of Kv11.1 protein
Autoři
JANKOVÁ, Natálie; Martin KRÁL ORCID; Olga ŠVECOVÁ ORCID; Jiří PACHERNÍK; Tomáš NOVOTNÝ ORCID a Markéta BÉBAROVÁ ORCID
Vydání
51. pracovní konference Komise experimentální kardiologie, 2024
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Konferenční abstrakt
Obor
30201 Cardiac and Cardiovascular systems
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Označené pro přenos do RIV
Ano
Kód RIV
RIV/00216224:14110/24:00137375
Organizační jednotka
Lékařská fakulta
Klíčová slova česky
S1021Qfs*98; hERG; Kv11.1; funkční analýza; technika patch clamp
Klíčová slova anglicky
S1021Qfs*98; hERG; Kv11.1; functional analysis; patch clamp technique
Změněno: 7. 11. 2024 10:24, doc. MUDr. Markéta Bébarová, Ph.D.
V originále
Úvod: Protein Kv11.1, kódovaný genem hERG (z angl. human ether-a-go-go related gene), vede rychlou komponentu zpožděného draslíkového proudu IKr, která se významně podílí na repolarizaci myokardu. Dopadem mutace v genu hERG, která snižuje funkčnost jeho proteinového produktu, je tedy zpoždění repolarizace a riziko vzniku arytmií. U naší probandky s diagnózou idiopatické fibrilace komor (iVF) byly nalezeny dvě mutace v genu hERG, a to S1021Qfs*98 a A228V. Cílem naší práce je zmapovat dysfunkci IKr kanálu způsobenou těmito mutacemi. V tomto příspěvku se zaměřujeme na funkční analýzu mutace S1021Qfs*98. Materiál a metody: Pro účely posouzení aktivity kanálu byla použita metoda whole cell patch clamp v módu vnuceného napětí při teplotě 37 °C. Gen hERG byl přechodně exprimován v buňkách linie CHO (z angl. Chinese hamster ovary), a to ve formě bez mutace (wild type, WT) nebo s mutací S1021Qfs*98. Výsledky: Registrovaný proud při napětí relevantním pro fázi plató akčního napětí (0 mV) poklesl o 70 % (při 0 mV: 219,4 pA u WT vs. 65,3 pA u S1021Qfs*98; P < 0,01, n = 17 a 18 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta aktivace τact nebyla signifikantně rozdílná (při 0 mV: 714,6 ms u WT vs. 571,6 ms u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 19 a 14 u WT, resp. S1021Qfs*98). Napětí, při kterém dochází k poloviční aktivaci kanálu V1/2 a sklon křivky k nejevily významné rozdíly (V1/2 = 2,75 mV a k = 8,64 u WT vs. V1/2 = 4,06 mV a k = 8,90 u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 17 a 18 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta deaktivace τdeact nevykazovala žádné statisticky významné změny (při -90 mV: 122,1 ms u WT vs. 144,2 ms u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 15 a 16 u WT, resp. S1021Qfs*98). Signifikantní rozdíly nebyly pozorovány ani u parametrů popisujících napěťovou závislost ustálené inaktivace (V1/2 = -59,1 mV a k = 21,66 u WT vs. V1/2 = -59,1 mV a k = 24,83 u S1021Qfs*98; P > 0,05, n = 14 a 8 u WT, resp. S1021Qfs*98). Časová konstanta inaktivace τinact byla u mutovaných kanálů delší o zhruba 65 % (při 0 mV: 5,9 ms u WT vs. 9,1 ms u S1021Qfs*98; P < 0,01, n = 15 a 11 u WT, resp. S1021Qfs*98). Závěr: Významný pokles proudu vypovídá o loss-of-function charakteru mutace S1021Qfs*98 a svědčí o jejím patogenním charakteru. Navzdory tomu nebyly zaznamenány žádné statisticky významné rozdíly u časové konstanty aktivace a deaktivace proudu a rovněž není rozdíl v jeho napěťové závislosti ustálené aktivace a inaktivace. Pozorované prodloužení časové konstanty inaktivace bylo signifikantní, avšak nemůže vysvětlit pozorovaný pokles IKr. V současné době se proto zaměřujeme na hodnocení celkové i povrchové exprese přirozených a mutovaných IKr kanálů s cílem objasnit původ pozorované dysfunkce.
Anglicky
Loss-of-function character of the S1021Qfs*98-hERG variant was confirmed. Its mechanism was suggested, however, has to be proved in the future.
Návaznosti
| MUNI/A/1547/2023, interní kód MU |
| ||
| NU22-02-00348, projekt VaV |
|